探讨“平冲降逆方”对离体培养人子宫内膜间质细胞的作用

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目的:建立人子宫内膜间质细胞模型,从细胞学层面探讨中医“平冲降逆方”对子宫内膜异位症的的作用机制。方法:采用胶原酶消化结合筛网过滤及离心分离法进行子宫内膜间质细胞的分离、培养及鉴定分为子宫内膜异位症和非子宫内膜异位症组,建立人子宫内膜异位症间质细胞模型。分别予中药方剂“平冲降逆方”浓缩剂(桂枝15g、血竭研末3g、五灵脂醋制10g、生蒲黄布包6g、沉香后下6g、水蛭滑石粉炒3g、麦冬10g、甘草6g)、米非司酮和生理盐水lml/100g连续灌胃7天,每日2次后提取血清。然后将中药血清、西药血清和空白血清分别加入培养液中培养间质细胞,采用MTT试验法测定间质细胞的存活情况,计算OD值并进行比较观察间质细胞增值情况;Transwell实验测定穿过的细胞数量观察迁移、侵袭情况;流式细胞仪检测凋亡率观察凋亡情况。结果:1.比较24、48、72h不同含药血清对子宫内膜间质细胞影响的吸光度值。与对照组相比,在相同时间里中药血清组对子宫内膜间质细胞增殖的抑制作用最明显,差异有统计学意义(P<0.05);不同时间里,48h时对增殖的抑制作用最好,差异有统计学意义(P<0.05)。2.比较内异症和非内异症患者子宫内膜间质细胞迁移能力,中药血清组内异症和非内异症子宫内膜间质细胞的迁移细胞数均少于空白血清组,且内异组优于非内异组,差异有显著意义(P<0.05)。其中20%中药血清组迁移细胞数最少。3.比较内异症和非内异症患者子宫内膜间质细胞侵袭能力,中药血清组内异症和非内异症子宫内膜间质细胞的侵袭细胞数均明显少于空白血清组,且内异组优于非内异组,差异有显著意义(P<0.05)。其中20%中药血清组侵袭细胞数最少。4.流式细胞术对不同处理组细胞进行细胞凋亡分析检测结果显示,各种血清处理均可使EMs和非EMs子宫内膜间质细胞发生凋亡,空白血清凋亡率低于西药血清,西药血清凋亡率低于中药血清,且对EMs内膜间质细胞的促凋亡作用强于非EMS子宫内膜间质细胞,差异有显著意义(P<0.05)。结论1.平冲降逆方对离体培养内异症子宫内膜间质细胞的增殖、迁移、侵袭行为有抑制作用,促进细胞的凋亡;2.平冲降逆方对细胞增殖的影响呈剂量时间依赖性;3.平冲降逆方对内异症子宫内膜间质细胞增殖、迁移和侵袭的影响作用强于正常子宫内膜间质细胞,对凋亡的影响弱于正常子宫内膜间质细胞;4.与米非司酮比较,平冲降逆方对细胞的增殖、迁移和侵袭有更大的抑制作用,对凋亡有更大的促进作用,提示:在EMs药物治疗对细胞影响方面,平冲降逆方可能较米非司酮更有效,为平冲降逆方治疗Ems作用机制提供新的理论依据。
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