目的：随着现代新型提取分离精制技术的发展，如超临界流体萃取技术等，使得中药易氧化、脂溶性及易挥发的有效成分得到了很好的提取分离。但这些有效成分脂溶性较强，体内吸收差、生物利用度低，因而得不到很好的临床应用，如何提高这些难溶性药物的溶出度以及生物利用度，突破制剂“瓶颈”，增加临床应用前景，是中药现代化的重要研究内容之一。超临界流体快速膨胀法（Rapid expansion of supercritical solutions，RESS），是近年来发展起来的制备药物微粒子的新方法，所得到的微米甚至纳米级粒子大大提高了药物的溶解性，为难溶性药物提供了新的增加溶出度的方法；而且在常温下的可操作性，也为中药提取物中的脂溶性强、易氧化、易挥发成分的制剂研究提供了新的方法。国内外对该技术已有较多研究，但对中药提取物的微粒化研究基本属于空白。本实验使用中药厚朴超临界二氧化碳（SCF-CO2）提取物为实验原料，利用RESS技术制备了厚朴SCF-CO2提取物超微颗粒和纳米液，以此探讨该技术应用于中药领域的可行性和优越性，并对制备粒子的各个因素进行了考察。 方法： 1．RESS制粒原理先将溶质溶解在超临界流体中，然后使超临界流体在非常短的时间（约10-5S）内通过特制喷嘴（20-200μm）进行减压膨胀，温度压力的突然变化使得溶质的过饱和度骤然升高，并在极短的时间内微核快速生长，形成粒度均匀的微米甚至纳米级超微颗粒。RESS过程中粒子容易发生聚集，一般制备得到的粒子为微米或近纳米级，粒径分布范围较宽。超临界快速膨胀溶液接收法（RSOLV），是将超临界溶液直接喷射到空气中改为喷射到液体溶液中，能够有效防止粒子聚集，可制备得到分散性良好的纳米级颗粒。 2．制粒原料的前处理由于中药厚朴SCF-CO2提取物成分复杂，对其制粒时，粒子形状极不规则、易聚集、具有油粘性，实验中尝试了多种辅料来改善粒子形态，结果发现原料中混合一定比例的β-环糊精后，能够明显的改善粒子形态、降低油粘性，实验中以厚朴SCF-CO2提取物：β-环糊精按质量比1：2混合为制粒原料，进行厚朴提取物超微颗粒和纳米液的制备。 3．工艺优选以平均粒径、厚朴酚（magnolol，MN）、和厚朴酚（honokiol，HN）的总酚含量为考察指标，采用L9（33）正交实验，对影响RESS制备厚朴SCF-CO2提取物超微颗粒和纳米液的主要因素（萃取压力A、喷嘴孔径B、萃取温度C）进行优选。 4．粒子评价按最佳工艺制备厚朴SCF-CO2提取物超微颗粒和纳米液，采用扫描电镜、激光散射仪、HPLC，对粒子的形态、粒径及粒子中有效成分含量进行考察，并结合溶出实验和动物实验对RESS超微颗粒和厚朴提取物颗粒的溶出度和药动学参数进行比较。 溶出度实验精密称取RESS粉末粒子约105．0mg（粒子中HN与MN总量约为100．0mg）、原料粒子125．0mg（粒子中HN与MN总量为100．0mg）各三份，进行溶出度实验。按药典2005年版第二部溶出度测定法中转蓝法，以15%甲醇为溶出介质，溶出介质体积为900mL，转速为100 r·min-1，温度为37℃，分别于5，10，20，30，45，60，90 min定点取样5 mL（同时立即补充释放介质5 mL），微孔滤膜过滤，取滤液25μL，HPLC法测定。根据回归方程计算出各时间点MN、HN的量，以两者之和作为溶出量，采用重复测量数据的方差分析法，比较两组粒子的溶出度是否有显著差异。 动物实验取108只清洁级SD大鼠，雄性（体重276g±28g），平均分为A，B两组，给药前禁食12h，A组灌胃原料粒子混悬液（45%乙醇为溶剂，HN、MN含量分别为10．06 g·L-1、8．53 g·L-1），B组灌胃RESS粒子混悬液（45%乙醇为溶剂，HN、MN的含量分别为10．27 g·L-1、8．26 g·L-1），每只大鼠灌胃5ml，再将A，B组各自分为9个小组，每个小组6只大鼠代表一个时间点，共9个时间点，分别为给药后0．5h、0．8h、1．2h、1．5h、2．5h、4h、7h、12h、24h，每只大鼠心脏取血1．5mL，置肝素预先处理的EP管中，8000r·min-1离心6min，分离血浆，-20℃保存备用。 结果： 1．粒子形态和粒径分布RESS制备的粒子为白色粒子，于扫描电镜下观察为不规则块状或片状，粒子间较为分散，采用SPM显微图像分析软件，对电镜图中420个粒子进行分析统计，计算得平均粒径为4．7μm，粒径分布在0．2～24．1μm之间；厚朴提取物粒子为橘黄色，具油粘性，扫描电镜下观察呈团状或块状，粒子与粒子紧密粘聚。RESOLV纳米液为乳白色澄明液体，原子力显微镜下观察呈类球形，平均粒径为303．0nm，粒子分布在193．6～467．5nm之间。 2．正交实验RESS粒子9个样品的平均粒径分布在4．7～10．2μm之间，萃取压力、喷嘴孔径及温度的变化对粒径的影响均不存在显著差异（P>0．05）；9个样品中平均总酚含量分布在75．1%～90．3%之间，萃取温度和萃取压力的变化对总酚含量的影响存在显著差异（F=26．965，P=0．036； F=21．309，P=0．045），各因素主次为C>A>B，综合粒径和总酚含量的影响，结合粒子制备时能源消耗、产率等实际情况，选择最佳制备工艺条件为A282C3，在此条件下制备的粒子平均粒径为4．7μm，总酚含量为91．2%。 RESOLV纳米液9个样品的平均粒径分布在201．0～311．3nm之间，喷嘴孔径水平之间的变化对粒径的影响存在显著差异（F=25．080，P=0．038），各因素主次为B>A>C；9样品液中总酚浓度在0．017～0．169g·L-1之间，萃取温度水平间的变化对总酚含量的影响存在显著差异（F=25．278，P=0．038），各因素主次为C>B>A，综合粒径和总酚含量的影响，结合粒子制备时能源消耗、产率等实际情况，选择最佳制备工艺条件为A283C3，在此条件下制备的粒子平均粒径为303．0nm，总酚含量为0．172 g·L-1。 3．溶出度实验原料粒子90min内，15%的甲醇中累积溶出量为6．37mg·L-1；RESS粒子90min内，15%的甲醇中累积溶出量为14．77mg·L-1。统计分析结果显示，90min内，15%的甲醇中RESS粒子的溶出度显著高于原料粒子溶出度（F=73．59，P=0．001），所有时间水平间均存在显著差异（F=233．683，P=0．000），时间与组别有显著的交互效应（F=51．149，P=0．000），两者变化趋势明显不同。 4．动物实验两组大鼠分别灌胃原料粒子混悬液和RESS粒子混悬液后，于不同时间点测定血药浓度，得HN、MN的平均血药浓度．时间曲线，采用WINNONLN软件计算求得各个药动学参数，对两组药动学参数进行one-way ANOVA分析，结果表明RESS粒子组HN和MN的AUC0-t值、AUC0-∞值、Cmax值均显著高于原料粒子组。 结论：RESS技术可用于中药厚朴SCF-CO2提取物超微颗粒的制备，得到的粒子粒径小，分布均匀，其溶出度和AUC值、Cmax值均明显高于机械粉碎的厚朴提取物粒子，且操作温度低、工艺流程简单、对环境无污染、无有机溶剂残留。