本研究利用基因重组技术构建了可在真核表达系统毕赤酵母中稳定有效表达人小分子抗体scFv-Fc的表达载体pPICZα/scFv-Fc,建立了一套可表达筛选人小分子抗体scFv-Fc的真核表达体系。应用该表达体系构建人抗狂犬病毒小分子抗体scFv-Fc的表达文库,利用抗体的抗原特异结合活性从中筛选人抗狂犬病毒小分子抗体scFv-Fc,结果获得了新的具有狂犬病毒抗原结合活性的抗体可变区序列,其中克隆RS3(轻链可变区为κ链)和RS9(轻链可变区为λ链)具有较好的scFv-Fc小分子抗体表达及狂犬病毒抗原结合活性。进而在80L发酵条件下,对毕赤酵母工程菌RS3表达条件进行了优化,并建立一种适合于大规模纯化人抗狂犬病毒小分子抗体scFv-Fc的方法。另外,我们应用基因重组技术,将筛选获得的抗狂犬病毒小分子抗体RS3的重链和轻链可变区基因重组到本实验室已构建的完整人重链及轻链表达载体pPICZαCH及pPICZαCκ,利用分步整合法转化X33酵母菌对抗狂犬病毒全分子抗体进行分泌表达,制备具狂犬病毒抗原结合活性的完整人抗体,鉴定重组抗体的生物学活性。结果表明,在毕赤酵母菌中可经甲醇诱导产生具抗原结合活性的完整分泌型抗体。本实验的创新之处在于:1)利用毕赤酵母构建了人小分子抗体scFv-Fc的表达筛选体系并获得了新的具有狂犬病毒抗原结合活性的抗体可变区序列,国内外尚未见报道;2)建立了大规模发酵和纯化人小分子抗体scFv-Fc的方法,国内尚未见报道;3)利用分步整合法电转化X33酵母菌,制备得到具狂犬病毒抗原结合活性的完整人抗体。