猪卵母细胞的体外成熟及早期胚胎的体外培养技术是开展家畜胚胎发育研究和胚胎工程操作的重要内容。但是与体内获取的卵母细胞和胚胎相比,体外获得的卵母细胞与胚胎发育质量差是目前遇到的一大问题,因为在卵母细胞体外成熟及胚胎体外培养过程中容易受到自由基等多种其它因素的影响。亚细亚酸是一种从积雪草中分离出来的五环三萜烯,它的主要功能基团包括三个羟基,一个不饱和键以及一个羧基。有研究表明,亚细亚酸具有多种药理活性,包括抗凋亡、抗衰老、抗炎症、抗氧化等。但是亚细亚酸对卵母细胞体外成熟及早期胚胎体外发育的影响还未有报道,因此本研究旨在探究亚细亚酸对猪卵母细胞体外成熟及早期胚胎体外培养的影响及其可能的作用机制。具体内容如下:实验一:在猪卵母细胞体外成熟过程中补充亚细亚酸,研究其对卵母细胞体外成熟的影响。从卵巢中采集GV期的卵母细胞,进行42-44h的成熟培养后,统计MⅡ期卵母细胞的成熟率,结果显示,补充亚细亚酸组的卵母细胞的成熟率与对照组相比有小幅度提升但无显著差异。将卵母细胞进行PA及IVF处理后,发现在体外成熟期间补充亚细亚酸可显著提高早期胚胎的发育能力,且囊胚的质量也有显著提高。同时对卵母细胞的抗氧化能力进行检测,结果显示,补充亚细亚酸后细胞内的ROS水平显著下降且GSH水平显著升高。亚细亚酸还缓解了由ROS累积引起的线粒体功能障碍,提高了细胞内的ATP水平。通过β-半乳糖苷酶检测发现亚细亚酸也可有效缓解卵母细胞的衰老进程。此外,除了关注卵母细胞外,还检测了与它密切相关的卵丘颗粒细胞的状态,发现经亚细亚酸处理后与卵母细胞共培养的卵丘细胞的相对扩散面积增加,且经流式细胞术检测后结果显示卵丘细胞的抗氧化能力提高,凋亡率下降。实验二:在猪早期胚胎体外培养过程中补充亚细亚酸,研究其对猪早期胚胎体外发育的影响。结果表明,在体外培养期间补充10μM的亚细亚酸可显著提高PA、SCNT和IVF猪早期胚胎的发育能力。进一步的分析表明,亚细亚酸能够显著减缓由H₂O₂诱导的细胞内ROS累积的状况。值得注意的是,亚细亚酸不仅提高了细胞内GSH的水平,还缓解了线粒体功能障碍。实时荧光定量结果分析显示,在核移植的囊胚中,亚细亚酸能够上调抗氧化相关基因Sod-1和囊胚孵化相关基因Cox-2的表达,下调凋亡相关基因Caspase-9的表达。综上所述,研究结果表明在卵母细胞体外成熟过程中补充亚细亚酸能有效提高卵母细胞的抗氧化能力,改善猪卵母细胞质量,提高后续早期胚胎的体外发育能力。另外在早期胚胎发育过程中补充亚细亚酸能够提高早期胚胎体外发育潜能,保护早期胚胎免受氧化应激损伤的影响。