肥头鲦血红素加氧酶-1(HO-1)基因的克隆与表达研究

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血红素加氧酶(heme oxygenase, HO)是血红素代谢的限速酶。HO-1也称热休克蛋白32(Heat shock protein32, HSP32),能够抗氧化、抗凋亡、抗炎症、抗增殖等,具有细胞保护作用。越来越多的研究亦显示HO-1可拮抗微生物感染,且在病毒感染中可能也具有保护作用。目前有关HO-1与病毒感染的相关研究主要集中于哺乳动物。为了研究病毒感染对鱼类HO-1表达的影响,以及鱼类HO-1在病毒感染中的作用,从而提供可能的病毒性疾病的治疗新方法,本研究以鲤鱼上皮瘤细胞(Epithelioma Papulosum Cyprini,简称EPC)为实验材料,克隆得到肥头鲦HO-1基因的cDNA全序列,进一步从细胞水平上探讨了鲤春病毒血症病毒(SVCV)感染及钴原卟啉(CoPP)对肥头鲦(Pimephales promelas) HO-1基因表达的影响,主要结论如下:1.肥头鲦HO-1基因cDNA的克隆及系统进化分析利用RT-PCR及RACE法从EPC细胞中克隆得到肥头鲦HO-1cDNA。该序列全长为1110bp,5’端非翻译区为52bp,3’端非翻译区为203bp,3’非编码区含有多聚A加尾信号(AATAAA)、RNA不稳定序列(ATTTA),其开放阅读框(ORF)为858bp,编码285AA。功能预测显示其含有一个血红素加氧酶特征序列(AA129-152)和跨膜区(AA264-285)。氨基酸序列分析表明,肥头鲦HO-1与哺乳动物、鸟类及其他鱼类的HO-1同源,与鱼类的同源性较高(58.8%-72.7%),且与斑点叉尾鮰和蓝鲶的同源性最高,分别为72.4%和72.7%,与人、鼠、鸡的同源性较低,分别为44.1%、44.1%,45.4%。2SVCV感染对肥头鲦HO-1表达的影响研究利用RT-PCR及Real-TimePCR技术在细胞水平上研究SVCV感染对HO-1的表达影响时发现,在1MOI感染条件下,同对照组比较,HO-1的表达水平在感染3小时即下降,在感染6小时后达到最低值,进而有缓慢的升高,但仍低于对照组。在0.1MOI感染条件下,同对照组比较,HO-1的表达水平在感染后6小时开始下降,在12小时至最低值,至24小时有缓慢的上升,但仍低于对照组,结果说明SVCV感染能抑制HO-1的表达。3.钴原卟啉(CoPP)对肥头鲦HO-1的诱导表达研究以不同浓度的钴原卟啉(CoPP)对EPC细胞进行处理,运用半定量RT-PCR技术检测肥头鲦HO-1基因的表达情况,结果显示CoPP不能诱导HO-1表达。
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