背景虫媒病毒(Arbovirus)是指一些通过吸血节肢动物叮咬敏感脊椎动物而引起的自然疫源性疾病及人兽共患病的病毒。作为虫媒病毒,必须具备能在节肢动物体内繁殖,而且经过一定的外潜伏期,通过叮咬吸血又将病毒传给新的宿主的能力。常见的可传播疾病的节肢动物媒介有蚊、蜱、白蛉、蠓、虻、螨,尤以蚊、蜱、蠓和白蛉最为重要。在已知的虫媒病毒中,仅以蚊虫为传播媒介的蚊传病毒就有300余种。它们引起的疾病负担严重。包括登革热病毒引起的登革热、乙脑病毒引起的乙型脑炎、寨卡病毒引起的格林巴利综合征等疾病。因此蚊传虫媒病毒及其相关疾病是对人类健康具有极大威胁的疾病,也是国际关注的公共卫生问题。内蒙古自治区地处我国北部边境,东、西长而南、北窄,境内共有大小河流千余条,内有黄河流经并且冲积形成了河套平原,气候以温带大陆性季风气候为主,夏季日照充足,雨水集中,有山川、平原、荒漠等地貌。多样的环境会孳生多种多样的蚊虫,并且可能会存在多种虫媒病毒。内蒙古自治区曾是出血热、乙脑等虫媒疾病的历史老疫区,1950-2007年间共报告乙脑4850例年代曾有乙脑的爆发流行,造成了巨大的经济损失。内蒙古自治区面积广袤,天然草场辽阔,是我国重要的畜牧业基地,人与牲畜关系密切。而虫媒病毒的传播依赖于人畜、吸血昆虫等媒介,人和家畜关系密切会加大虫媒病毒的传播几率。而内蒙古自治区边境线绵长,东起东经126°04′,西至东经97°12′,横跨经度28°52′,东西直线距离2400多千米,与蒙古国、俄罗斯联邦以及我国宁夏、山西、河北等8个省份交界,这意味着内蒙古地区的虫媒病毒可以向四周交界地区广泛传播,可以成为一个当地虫媒病毒的疫源地,同时也是我国虫媒病毒传播出去以及国外虫媒病毒向内输入的“港口”,随着当地旅游业的发展、各地区国家贸易往来以及人员的流动,都为虫媒病毒的输入提供了条件,极易发生虫媒病毒的“交流往来”,但是时至今日,仅在2007-2008年间的虫媒病毒的调查中发现Tahyna病毒、版纳病毒和淡色库蚊浓核病毒。而此后未见有蚊虫标本采集调查及系统性的虫媒病毒调查研究,为了对内蒙古自治区虫媒病毒的种类及分布有更全面的了解,掌握当地蚊虫和蠓虫携带病毒的种类以及流行特点,本研究于2014、2017、2018年3年对内蒙古自治区5个县(旗)进行系统的蚊虫和蠓虫标本采集和虫媒病毒的调查研究。目的了解内蒙古自治区部分地区夏季蚊虫和蠓虫种类和分布,并发现当地主要吸血昆虫:蚊虫和蠓虫所携带的虫媒病毒。本研究结果对当地蚊虫和蠓虫传播的人畜疾病的预防控制提供基础数据。方法2014、2017、2018年7、8月份在内蒙古自治区5个县(旗/区)的人舍和动物饲养圈(猪圈、牛圈、羊圈等)蚊虫孳生环境用灯诱法采集蚊虫和蠓虫标本。对采集的标本在冰浴条件下进行形态学分类,按照采集环境和蚊虫等信息(蚊虫每50-100只分为一管,蠓虫大约500-1000只为一管)编号登记,立即放入液氮中保存并转移至实验室待检。标本在实验室研磨、离心,离心上清液平行接种BHK-21细胞(金黄色地鼠肾细胞)和C6/36细胞(白纹伊蚊卵细胞)进行病毒分离。细胞出现病变作用(CPE)时收取病毒液使用分子生物学方法对阳性分离物进行分子生物学鉴定,使用多种软件对病毒基因组核苷酸序列进行序列同源性分析及分子遗传学分析。结果2014、2017、2018年7-8月在内蒙古自治区共采集蚊虫2属3种24240只蚊虫(淡色库蚊、背点伊蚊、刺扰伊蚊),17110只蠓虫。淡色库蚊和背点伊蚊是当地的优势蚊种,分别占蚊虫采集总数的64.4%(15600/24240)和33.5%(8120/24240)。蚊虫和蠓虫标本共研磨223批次。经实验室常规处理后平行接种BHK-21细胞和C6/36细胞,共获得4株可以稳定传代的病毒分离物,经分子生物学检测与鉴定其中1株病毒为盖塔病毒,3株分离物为浓核病毒,蠓虫标本未获得病毒分离物。使用11种病毒属特异性和种特异性病毒基因扩增引物对223批标本研磨液进行病毒基因扩增获得5个阳性结果,经分子生物学鉴定,其中1个为盖塔病毒,3个为浓核病毒,1个为乙脑病毒。乙脑序列是基因Ⅰ型乙脑病毒,在NS4b和NS5基因区段上与SXYC1523病毒株亲缘关系最近,盖塔病毒在E2基因上与GS10-2亲缘关系最近,在E2基因区段上与蒙古国分离株(LEIV17741MPR)的核苷酸(氨基酸)序列的同源性为98.6%(99.8%)。结论本研究于2014、2017和2018年夏季连续在我国的内蒙古自治区共5个县(旗/区)自然环境采集到大量蚊虫和蠓虫,内蒙古自治区5县采集到3种蚊虫而淡色库蚊为当地优势蚊种。在以上地区的蚊虫标本中共分离到4株可以稳定传代的病毒分离物,其中在磴口县采集的蚊虫标本中分离到1株盖塔病毒,这是我国在内蒙古地区首次分离到盖塔病毒,具有重要的流行病学意义;还分离到3株浓核病毒,这与曹玉玺等人在2008年在内蒙分离到的浓核病毒结果相一致,提示当地可能存在浓核病毒在自然界的循环。在五原县蚊虫标本中检测到1株乙脑病毒,这也是内蒙古自20世纪80年代以来首次在蚊虫标本中检测到乙脑病毒,提示当地可能存在乙脑病毒在自然界的循环,这些病毒的发现,尤其是盖塔病毒和乙脑病毒,不仅对内蒙古地区甚至对蒙古高原地区及我国内陆地区蚊虫传播病毒引起的人和动物性疾病的预防控制提出新的挑战。