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由高致病性禽流感病毒引起的人禽流感已成为人类潜在威胁之一,虽然目前尚无证据表明这种病毒获得了人间传播能力,但近年来禽类H5N1亚型流感在全球范围内的不断爆发,使用高致病性禽流感病毒与人流感病毒重组的空间空前加大,一旦这种病毒发生变异、重组而获得人传人能力,将会引起人类的流感大流行。目前使用的流感疫苗与药物尚无法应对人禽流感大流行,而人禽流感疫苗的研制尚处于研究阶段,真正用于临床还有一段距离。因此急需研制新型的人禽流感救治药物。流感病毒免疫血清含有病毒中和性抗体,可在病毒入侵时发挥特异、快速中和作用,Luke等对1918-1925年间世界流感统计数据进行了综合研究分析,结果表明,在1918年西班牙大流感流行期间,康复者血清可有效降低病死率;Palladino等用中和性单抗来治疗免疫缺陷的A型流感病毒感染小鼠,显示出良好的治疗效果,提示抗体疗法可在最短的时间内阻止商情的扩散蔓延,成为未来对抗H5N1亚型人禽流感最有效的手段之一。由于难以获得人源血清,因此动物源免疫血清成为现阶段抗体治疗必然的替代手段。本研究以哺乳动物源H5N1亚型禽流感病毒为免疫原免疫健康马匹,通过对不同免疫剂量和免疫间隔免疫后抗体消长情况比较,建立了适合的免疫程序,并以此制备了高效价免疫血清,HI效价可达1:2560,SN效价可达1:5120。以此高免血清对实验感染小鼠进行了免疫保护实验,结果表明提前4-7天给小鼠腹腔注射0.2mL高免血清,可有效抵抗10个LD50病毒的攻击,提供100%保护;以5个LD50病毒感染小鼠,在攻毒24小时后注射0.2mL和0.4mL高免血清,小鼠发病率和病死率均为0,效果优于达菲。在此基础上,对高免血清的精制纯化工艺进行了摸索,优化建立了以IgG提取、胃酶消化、离子交换纯化为主要步骤的马抗禽流感病毒精制免疫球蛋白纯化工艺,精制F（ab’）2抗体纯度可达90%以上,各项理化学指标符合国家相关生物制品要求,经对其治疗效果进行评价,以3个LD50的H5N1病毒感染小鼠,在攻毒后24h和48h腹腔注射0.4mg和0.8mg精制抗体,保护率可达80%以上,效果明显优于达菲。由于流感病毒的复制必须依赖于宿主感染细胞,并且病毒复制过程中,病毒囊膜表面蛋白（HA、NA、M2）在细胞内翻译后首先通过高尔基体运送到细胞膜表面,然后在病毒出芽时包装到病毒囊膜上,因此以感染细胞膜表面病毒结构蛋白为靶标的重组免疫毒素可以特异杀伤病毒感染细胞,从而破坏病毒复制场所,进而抑制病毒复制。为此,本研究以H5N1亚型禽流感病毒免疫Balb/c小鼠,采用单克隆抗体技术,筛选到1株针对HA蛋白的单抗,Western-blot试验证明该株单抗可与纯化的HA特异结合,非竞争ELISA试验表明该株单抗亲和力常数为4.6×109M-1,间接免疫荧光试验结果表明该株单抗与感染细胞作用后分布在细胞膜表面,可作为重组毒素的靶向载体。在此基础上,利用分子生物学技术,扩增到该株单抗的抗体可变区基因,并采用SOE法合成了单链抗体基因（HA-ScFv）,测序结果表明,HA-ScFv全长714个核苷酸,编码238个氨基酸,分子量约为35KD,三维构象符合单链抗体空间构型。将此单链抗体基因与绿脓杆菌外毒素（PE40）基因连接,装入原核表达载体pET-28a中,成功构建了重组免疫毒素原核表达载体pPET-HAScFv-PE40,经诱导表达及Western-blot试验鉴定,成功表达了重组免疫毒素,细胞杀伤试验结果表明重组免疫毒素的最大细胞杀伤率为65.1%,并可有效抑制流感病毒复制,荧光定量PCR结果表明用药组病毒含量较对照组下降10倍。