兽医微生物菌种资源标准化平台建设是国家自然科技资源共享平台的一个重要组成部分。其目的旨在建设兽医微生物资源的信息互通、以共享为核心的制度体系,以及培育专业化技术管理人才。本实验为国家兽医微生物菌种资源标准化菌种收集的一个组成部分。作者分别对山东收集的一例PRRSV可疑病料和北京收集的两例CDV可疑病料进行处理,最终分离得到PRRSV病毒一株,命名为TA-2;CDV两株,分别命名为CAU-1、CAU-2。采集山东地区的疑似PRRS的病猪病料—肺、肺门淋巴结、脾脏和脑组织,碾磨破碎后,无菌条件下分别将其攻毒至生长良好的MARC-145细胞(含飞片),并逐日观察,发现在第3d后出现明显CPE;第5d后MARC-145细胞出现明显凋亡,并从细胞培养瓶脱落;第7d时,部分培养瓶内细胞出现空斑现象。此时取出细胞飞片进行IFA检测。在暗室内与PRRSV FITC荧光抗体作用,然后荧光显微镜下可发现部分样品会出现绿色荧光。另外将出现CPE的细胞裂解提取RNA后,进行RT-PCR检测。PCR产物电泳后染色显像系统观察,可见有与目的片段一致的条带。最后综合以上结果可确定,该病猪确诊为PRRSV。将分离得到的PRRSV命名为TA-2株。CDV的分离来自中国农业大学动物医院的两只疑似犬瘟热患狗。将两只狗解剖后发现存在着不同程度的肝、肾、肺病变,镜下发现神经系统也出现一定病变:脑神经细胞肿胀,细胞变圆,并有卫星现象的形成。将无菌采取的病料攻毒致生长良好的VERO和MDCK细胞中,逐日观察可见明显CPE的出现。分别对临床病料和攻毒后的细胞进行RT-PCR检测,均得到阳性结果;将细胞培养扩增后的CDV通过蔗糖密度梯度离心后进行电镜观察,但结果并不理想;对细胞进行H.E.染色光镜观察,在细胞攻毒2天后细胞浆出现空泡,并有噬酸性胞浆包涵体。综合以上结果,可以确诊两只犬死前均患有犬瘟热。并得到两株CDV,分别命名CAU-1、CAU-2。综上所述,通过运用组织病理学检测方法、病毒的细胞培养和分离、荧光抗体技术和RT-PCR检测方法对病毒进行鉴定,并成功采用低温冻干保存法对鉴定的毒株进行保存。本实验的顺利完成不仅丰富了兽医微生物菌(毒)种库资源,而且为这两种病毒进一步的分子生物学研究和临床检测技术开发奠定了一定的基础。