背景与目的:近些年来,因外伤,炎症等原因造成牙列缺失的患者逐渐增多,模仿天然牙根的种植义齿修复方式成为了越来越多患者的首选。种植义齿成功的关键因素之一是种植体周围具有充足的骨量,然而牙列缺失后常常伴有牙槽骨的过度吸收,造成种植体周围牙槽嵴的骨量不足,进而导致种植义齿的失败。引导骨组织再生术(guided boneregeneration,GBR)的出现极大的改善了这一难题。通过具有生物相容性的人工膜屏障软组织长入,维持骨生成空间。因此,屏蔽膜的作用十分重要,但无论是可降解还是不可降解的屏障膜,都存在一定的弊端。不可降解膜虽然具有良好的机械稳定性,能够充分维持空间,不影响组织再生的过程,然而在屏障软组织的同时也会阻挡软组织为其膜下方的组织提供血供,长时间放置会导致伤口裂开,增加感染的风险,临床上常在植骨术后数月取出。而可降解膜不需二次取出,但机械性能欠佳,且价格较昂贵。有部分学者认为在GBR手术中,比起可降解膜,不可降解膜能够更好的维持骨的高度和宽度。当新骨生成有能力阻挡软组织长入时,可不再需要不可降解的屏障膜,且屏障膜过长时间的放置反而会造成骨生成的延迟。但目前对于不可降解屏障膜取出的具体时间点尚不明确。目前,国际上常用的不可吸收屏障膜主要是聚四氟乙烯(polytetrafluoroethylene,PTFE)膜。但是聚四氟乙烯膜的最佳屏障时间是有争议的,并且PTFE在促进细胞增殖方面的作用并不理想。相比之下,钛膜不仅满足了作为屏障膜的条件,能够隔离软组织的长入,维持骨生成空间,同时钛膜还具有促进成骨细胞粘附的作用,其光滑表面和低孔隙率也可以减少细菌粘附。在临床应用中,钛膜通常在3到6个月后被移除,其有效屏障时间是模糊的。另外,由于不同的骨缺损修复材料促进成骨的能力不同,所以钛膜对其屏障的最佳时间也不同。目前临床应用的成骨材料主要分为自体来源和非自体来源两种。自体来源的成骨材料以富血小板纤维蛋白(platelet-rich fibrin,PRF)为代表,它是自体静脉血离心获取的促成骨材料,价格低廉,制备方式简单且成骨效果显著,其天然的支架材料以及丰富的生长因子获得了众多临床学者的青睐。非自体来源的成骨材料目前临床主要以人工骨粉为主,其中以羟基磷灰石为代表的生物陶瓷材料占据重要地位。羟基磷灰石与β-磷酸三钙构成的比例不同,促成骨性能不同。有研究表明,当羟基磷灰石与β-磷酸三钙以6:4的比例构成时,能更好的发挥二者的优势,促进新骨的形成。因此,本实验采用钛膜作为屏蔽膜,以临床上常用的PRF,类骨质羟基磷灰石,及二者的混合物作为骨缺损修复材料,探究其在GBR应用中的最佳屏障时间。实验方法:1.36只成年健康白兔随机分为实验组A(18只)和对照组B(18只)。实验组与对照组又分别随机分为6个亚组(A1-A6和B1-B6,n=3),不同的亚组代表不同的时间点。一期手术36只兔子进行统一的操作,每只兔子的颅骨各制备4个直径为6mm的圆形骨缺损,分别填充PRF,类骨质羟基磷灰石,PRF与类骨质羟基磷灰石的混合材料以及空白组。缺损表面覆盖2cm×2cm的钛膜,棱角修整,四枚钛钉固定。1周后,二期手术去除A1组的钛膜,对照组B1组不去除钛膜,A1、B1组白兔二期术后继续饲养2周后一同处死。2周后,二期手术去除A2组的钛膜,对照组B2组不去除钛膜。A2、B2组白兔二期术后继续饲养2周后一同处死。依此类推,直至术后6周,二期手术去除A6组的钛膜,对照组B6组不去除钛膜,A6、B6组白兔二期术后继续饲养2周后一同处死.2.通过影像学评估(microcomputed tomography,micro-CT)新骨生成量及密度,组织学(HE,Masson三色染色)评估新骨生成面积、骨组织成熟度,免疫组化检测骨钙素的表达从而评估成骨细胞活跃度。结果:1.影像学结果显示,4w前,空白组中的对照组新骨生成量显著高于实验组;2w前,PRF组中的对照组新骨生成量显著高于实验组,3w、4w时实验组与对照组无差异,但至5、6w时,实验组与对照组重新出现了统计学差异,并且是实验组优于对照组。2.通过HE染色结果计算新骨生成量占骨缺损面积的百分比,显示PRF组从3w开始,对照组与实验组无差异,空白组从5w时开始无差异,与影像学结果相吻合。而类骨质羟基磷灰石组和混合组均在实验后期开始无差异。并且所有组别在6w时实验组与对照组均重新出现了统计学差异,并且实验组优于对照组。3.Masson染色结果显示,随着时间的增长,实验组与对照组骨组织愈加成熟,初期对照组的新生血管数量更多,有更多活跃的成骨细胞围绕在新骨周围。4.免疫组化结果显示,1w时各组的对照组均表现出了强阳性的结果,成骨细胞数量多于实验组,PRF组的对照组更为明显,随后阳性程度逐渐减弱。在骨粉组和混合组中,实验组早期弱阳性,而对照组则呈现中度甚至强烈的阳性结果,随着时间的推移,实验组的阳性结果逐渐增强。至6w时,各组基本呈现弱阳性结果。结论:本实验结果表明,屏障膜的存在能够有效的屏蔽软组织,并且在恰当的时间内去除屏障膜有利于引导骨再生。不同的骨缺损充填材料表现出了不同的成骨潜能,PRF组钛膜的最佳去除时间为3周,混合组钛膜的最佳去除时间为4周,而空白组和骨粉组钛膜的最佳去除时间为5周。