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目的：作为最常见的恶性肿瘤之一,乳腺癌严重威胁着现代女性的健康。紫杉醇(Taxol,TAX)被广泛用于包括乳腺癌在内的妇科肿瘤的治疗,但临床上耐药的发生往往导致患者治疗失败和死亡。近年来的研究表明,转录因子Twist能促进肿瘤耐药的形成,但是其机理的研究还远未深入。基于此,本研究采用免疫组织(细胞)化学技术来探讨Twist以及多药耐药相关蛋白(Multidrug Resistance Related protein,MRP)、P糖蛋白(P-Glycoprotein,P-gp)、肺耐药蛋白(lung Cancer Resistance Protein,LRP)、拓扑异构酶Ⅱa (TopoisomeeraseⅡa,TOPOⅡ)四种耐药相关蛋白在人乳腺癌组织和紫杉醇耐药的人乳腺癌细胞株MCF-7中的表达情况,在人体组织、细胞层面揭示Twist和肿瘤细胞耐药的相关性；采用双向电泳(Two-dimensional electrophoresis,2-DE)技术筛选出人乳腺癌细胞MCF-7在获得性耐药过程中主要差异表达蛋白,为进一步揭示乳腺癌紫杉醇耐药机制,并为探索新的治疗耐药肿瘤的分子靶点提供实验依据。方法：1、采用免疫组织化学技术检测人乳腺癌组织和癌旁组织中Twist蛋白与MRP、P-gp、LRP、TOPOⅡ表达之间的相关性。2、以人乳腺癌细胞株MCF-7和由紫杉醇诱导的耐药株MCF-7/Taxol(又分为四个药物诱导阶段细胞株,分别称为：MCF-7/Taxol、MCF-7/TaxolⅡ、MCF-7/TaxolⅢ、MCF-7/TaxolⅣ)为对象,采用免疫细胞化学方法分析Twist蛋白和MRP、P-gp、LRP、TOPOⅡ的表达相关性。3、分别提取MCF-7和四种耐药细胞总蛋白,通过双向凝胶电泳分离,即第一向采取固相pH梯度等电聚焦电泳,第二向采用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳,最后进行硝酸银染色,通过ImageMaster双向电泳图像分析软件对2-DE图谱进行数字化分析匹配与对比,寻找差异蛋白质。结果：1、在乳腺癌和癌旁组织中Twist与各耐药蛋白的表达存在显著差异,阳性反应均为棕色。Twist与MRP、TOPOⅡ、P-gp三种耐药蛋白在乳腺癌中的表达高于癌旁组织(P<0.05),而LRP在癌旁组织的表达高于癌组织(P<0.05)。2、与亲本MCF-7细胞相比,MCF-7/Taxol细胞内Twist、MRP、TOPOⅡ、P-gp的阳性颗粒均有所增加,且染色加深；而LRP的棕色颗粒却减少,染色变浅。3、初步建立和优化了MCF-7细胞的双向电泳技术,并获得了比较清晰的电泳图谱。图像分析显示MCF-7和MCF-7/Taxol的双向电泳图谱相似,蛋白点位置重复性较好。MCF-7 2-DE图谱可识别的点为269个,MCF-7/TaxolⅣ为170。以MCF-7 2-DE图谱作为参考胶,MCF-7/TaxolⅣ中平均蛋白匹配点为128个,蛋白点匹配率为75.3%。两种细胞图谱中差异表达的蛋白斑点有13个。结论：1、在癌组织中Twist与MRP.TOPⅡ、P-gp的高表达具有高度的一致性,提示Twist与人乳腺癌耐药性的形成具有相关性。2、与亲本细胞相比,MCF-7/Taxol细胞内Twist、MRP、TOPOⅡ、P-gp的蛋白表达逐渐增加,表明在乳腺癌细胞紫杉醇耐药性逐渐形成的过程中,Twist的表达增高,并且与常见耐药蛋白的表达量增高呈现同步性,提示Twist在乳腺癌紫杉醇获得性耐药中发挥了重要作用,并与耐药蛋白的高表达具有相关性。3、初步分析了MCF-7及其对应的耐药细胞株MCF-7/Taxol之间存在的差异表达蛋白,可初步确定的蛋白分别为B-促性腺激素、果糖1,6-二磷酸酶、膜联蛋白A2、Ras相关核蛋白,它们分别涉及肿瘤转移、能量代谢、细胞增殖等生命活动,筛选出的差异蛋白质为进一步研究乳腺癌的紫杉醇耐药机制奠定了基础。