【摘 要】
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该研究以禽巴氏杆菌C的外膜蛋白H和细胞因子鸡IL-18为研究对象,探讨外膜蛋白H的免疫原性及鸡IL-18分子免疫佐剂作用,为禽巴氏杆菌病的新型疫苗研究提供新的思路.根据Genbank
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该研究以禽巴氏杆菌C<,48-1>的外膜蛋白H和细胞因子鸡IL-18为研究对象,探讨外膜蛋白H的免疫原性及鸡IL-18分子免疫佐剂作用,为禽巴氏杆菌病的新型疫苗研究提供新的思路.根据Genbank中注册的禽巴氏杆菌外膜蛋白H基因(outer membraneprotein H,ompH)核苷酸序列,设计一对特异性引物,应用PCR方法扩增出了C<,48-1>的ompH全长片段,将ompH进行T-A克隆,后进行序列测定和分析.结果表明,ompH全长1597bp,含有一个1056bp的开放性阅读框,编码352个氨基酸,前20个氨基酸残基为信号肽.与已知的15个血清型菌株及疫苗株CU的ompH核苷酸及氨基酸序列比较,核苷酸同源性在51.5-98.7%之间,氨基酸同源性在39.3-98.7%之间.氨基酸多序列比较显示,血清型特异性抗原表位位于60-80位和200-220位氨基酸处.综合该实验研究,首次成功测定了C<,48-1>外膜蛋白H基因的全基因序列;成功获得了Omp<,m>H重组蛋白和重组真核表达质粒pcDNA3.1/ompH及共表达质粒pcDNA3.1/ompH-cIL-18.鸡免疫和攻毒实验结果显示,禽巴氏杆菌C<,48-1>外膜蛋白H具有良好的免疫原性,能够诱导鸡体产生保护性抗体.鸡IL-18能够显著增强ompH DNA疫苗的免疫原性,提高鸡体细胞和体液免疫水平.为进一步研制安全、有效的禽巴氏杆菌外膜蛋白基因工程疫苗及鸡IL-18分子佐剂奠定了良好的基础.
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