间苯二甲腈降解菌的分离筛选及其降解机理的研究

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间苯二甲腈作为常用的一种农药中间体,同时运用于制取塑料、合成纤维及环氧树脂固化剂等,对动物具有明显的致畸、致癌、致突变作用,对人类具有潜在的致癌性,针对其大量生产带来的环境污染问题,从生物降解的角度出发,分离筛选间苯二甲腈的高效降解菌,并研究降解菌的降解特性和降解机理。将泰州百力化学有限公司采集的污泥样品富集驯化培养后,分离筛选得到四个菌株NJUST1101、NJUST1102、NJUST1103、NJUST1104,经鉴定分别属于:芽孢八叠球菌属、微球菌属、葡萄球菌属和固氮菌属。其中NJUST1101是其中的优势菌种,就其生物学特性做以下研究:对NJUST1101降解间苯二甲腈的条件做如下研究:当培养基初始pH在5.0-9.0之间,间苯二甲腈的降解率都在80%以上,这说明NJUST1101中性以及弱酸弱碱性的环境中生长良好;当其他条件一定,培养温度为25℃时,降解率最高为91.32%;无机盐培养基中,间苯二甲腈的溶解度不超过500mg/L,在此范围内其都能被NJUST1101降解到低于10mg/L;设计温度,初始pH,初始浓度的三因素三水平的正交试验,其结果显示:27℃、pH7.0、400mg/L条件下降解率最高98.06%;在含有0.1%间苯二甲腈的无机盐培养基中,添加葡萄糖、硫酸铵、尿素为外加碳氮源时,与对照组相比,其并不影响间苯二甲腈的最终降解率。利用质谱分析间苯二甲腈生物降解的产物,发现NJUST1101降解间苯二甲腈的过程中,产生了间苯二甲酸,并未产生间苯二胺和二甲苯的中间产物,所以根据腈类化合物生物降解机理判断,NJUST1101在生物降解过程中经间苯二甲腈诱导产生腈水解酶并使其降解为间苯二甲酸。研究由间苯二甲腈诱导产生的腈水解酶,其作用的pH为6.5,作用的温度为30℃,在pH7.0-8.0酸碱稳定性好,在30℃及以下热稳定性好,粗酶液经过葡聚糖凝胶SephadexG-100的两次进柱分离后,得到单一的酶活峰及比较纯的由NJUST1101在间苯二甲腈诱导下产生腈水解酶,其分子量通过SDS-PAGE电泳,再和标准蛋白作对比为76kD。
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