研究目的:建立猪血凝性脑脊髓炎诊断方法;研究猪血凝性脑脊髓炎病毒(Hemagglu- tinating encephalomyelitis virus, HEV)感染后宿主的免疫应答反应;研究HEV S蛋白、M蛋白和N蛋白的免疫原性。研究结果:以HEV基因组保守性区域设计探针和引物,通过优化反应条件,建立了HEV荧光定量RT-PCR检测方法;以HEV血凝素-酯酶蛋白(Hemagglutinin-esterase protein, HE)基因序列作为候选基因,通过原核系统表达HE蛋白,利用纯化的HE蛋白作为包被抗原,建立了猪血凝性脑脊髓炎抗体间接ELISA检测方法。建立了小鼠急性感染HEV的动物模型,通过荧光定量RT-PCR方法和免疫组化对各组织内的病毒分布和病毒含量进行了检测;测定猪血凝性脑脊髓炎抗体、抗体亚类、脾细胞增殖反应、T细胞亚群和细胞因子的变化规律,以研究HEV感染后宿主的免疫应答反应。结果表明,不同感染时间内在各组织脏器中病毒含量不同,且其动态变化的规律也不相同;HEV感染后能够引起小鼠的免疫抑制,不能建立有效的体液免疫和细胞免疫保护机制。利用毕赤酵母表达系统表达了HEV M蛋白和N蛋白,以重组蛋白免疫小鼠后,检测抗HEV的特异性抗体、脾细胞增殖反应和ConA刺激后脾细胞上清中INFγ浓度的动态变化。结果表明,S1蛋白能够诱导HEV抗体水平明显升高;M蛋白和N蛋白能够诱导脾细胞增殖反应增强,诱导INFγ浓度升高。