狂犬病(Rabies)是由狂犬病病毒(rabies virus，RV)感染引起的一种人兽共患传染病，死亡率几乎达100％。虽然狂犬病是一种在3000多年前就已有记载的古老疾病，但是在最近的几十年内对于该病的发病机理才有了一定的了解，尚存多处盲点。本实验室通过已建立的反向遗传操作技术平台，成功地在狂犬病病毒HEP-Flury弱毒株G与L假基因区域插入萤火虫荧光素酶基因，构建了萤火虫荧光素酶标记的重组狂犬病病毒rHEP-luc株。　　 本研究对重组狂犬病病毒rHEP-luc株的生物学特性进行了研究，并与其亲代病毒rHEP-Flury相比较。重组狂犬病病毒rHEP-luc株经BHK-21细胞驯化后，能在该细胞上稳定增殖，37℃培养4d，病毒滴度可达4.0×106FFU/mL，和亲代毒株滴度相似；RT-PCR证实插入的荧光素酶基因能够稳定遗传，荧光素酶活性分析显示荧光素酶基因成功表达并且具有良好生物学功能。病毒致病性研究表明，重组狂犬病病毒rHEP-luc株和rHEP-Flury株仅对未成年鼠有致病力；不导致成年鼠死亡，仅轻微影响其体重变化，重组狂犬病病毒rHEP-luc株是较亲代病毒rHEP-Flury株更弱的病毒株。　　 为了研究病毒的移行规律，本研究模拟病毒在体内的离心扩散：颅内注射狂犬病病毒后分别于接毒后ld，2d，3d，4d，5d，6d无菌解剖老鼠，取鼠脑，心脏，肺脏，肝脏，肾脏，脾脏，肌肉等，检测各器官中的病毒分布情况，RT-PCR结果显示rHEP-luc株和亲本病毒rHEP-Flury株的核酸在SPF级6周龄昆明系母鼠体内检测不到；而在SPF级1周龄昆明系乳鼠在脑内可以检测到；而标准毒株CVS株可以从注射后第一天到小鼠发病比较长时间内都可在脑内检测到，第2，3天都可以在肾内检测到病毒核酸；但是样品的细胞培养后进行直接免疫荧光染色和解剖时的压印片进行免疫荧光染色，均未见到绿色荧光。　　 综上所述：本研究通过对狂犬病病毒rHEP-luc株与亲代病毒进行生物学特性比较，结果表明：携带荧光素酶基因的狂犬病病毒rHEP-luc株比亲代病毒病毒致病性低，经荧光素酶基因遗传稳定性及活性分析，病毒可以稳定携带荧光素酶基因进行复制增殖且具有感染性，表达荧光素酶具有很好的生物学功能。本实验主要对重组狂犬病病毒rHEP-luc株进行生物学的方面进行研究，并对狂犬病病毒离心性扩散进行初步的探索，为下一步的标记物示踪狂犬病病毒在体内侵染、复制及时空移行和动态分布规律，狂犬病病毒的致病性方面的研究奠定基础。