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对本实验室自主分离获得的茄子黄萎病生防内生性枯草芽孢杆菌29-12的发酵条件,通过培养条件优化及正交试验得出最佳培养基配方为:玉米粉15g/L,山芋淀粉5g/L,豆粕粉15 g/L,蛋白胨8 g/L,MgSO4 0.01%,K2HPO4 0.05%。最佳培养条件为:起始pH值7.5、250 mL,三角瓶装液量100 mL、摇瓶速度120r/min、接种量10%、温度30℃。在此条件下培养菌株29-12 84 h,抑菌圈大小为2.12 cm,菌量为1.58×109cfu/mL,芽孢得率为100%。
另外,通过硫酸铵沉淀、Sephadex G 25分子筛层析、DEAE-52离子交换层析、FPLC等手段,纯化菌株29-12产生的胞外抗菌活性物质。结果表明硫酸铵饱和度为40%-50%和50%-60%提取的物质具有较强的抑菌活性,说明该抗菌物质在硫酸铵饱和度为40%-60%时就可完全沉淀。利用Sephadex G 25分子筛层析后获得2个主峰,其中峰Ⅰ具有活性,将峰Ⅰ的收集液过DEAE-52阴离子交换层析,后获得3个峰,其中峰Ⅱ具有活性,再将峰Ⅱ收集液上FPLC300SB-C18柱,其中34min-37min的收集峰具有活性,经Tricine-SDS-PAGE检测,峰Ⅱ为分子量为1KD左右一条带。通过Q-TOF2分析,峰Ⅱ包含一簇分子量非常相近的化合物确定该活性物质分子量为1434.74u和1448.78u两种化合物,并对其进行了序列分析,确定该物质为FengyeinA的同系物。