家蚕（Bombyx mori）属鳞翅目蚕蛾科，可大规模饲养，遗传背景比较清楚，其丝腺具有合成和分泌丝蛋白的能力。蚕丝有纤维皇后之美誉，但也存在易霉变，黄化、皱缩、褪色和脆化等缺陷。为了探讨通过家蚕丝素基因（fib）的分子设计与遗传改造，从基因水平改善丝纤维的性能，本研究利用家蚕丝素轻链基因（fib-L）上游约1.2kb的第5~6外显子片段和约0.5kb的第7外显子及其下游序列作为基因打靶的左右同源臂，将gfp基因和人工合成的家蚕抗菌肽基因（cec）融合克隆插入到两同源臂之间，并使其与fib-L基因处于同一读码框；将由ie-1驱动的DsRed基因克隆至同源右臂右侧，作为负选择标记，构建基因打靶载体pSK-Fib.L-L-GFP-cec-Fib.L-R-IE-DsRed-PolyA。将该载体转染BmN细胞后，发现部分转染细胞呈现绿色荧光而无红色荧光，表明载体构建成功。将该载体通过精子介导转入家蚕卵，在G0代筛选茧呈绿色荧光的家蚕，PCR检测证实筛选出的蚕为转基因家蚕；同蛾圈转基因家蚕杂交传代，用GFP抗体对G6代家蚕后部丝腺组织进行western blot检测，可观察到Fib-L-GFP融合蛋白的特异性条带；抗菌性实验显示，转基因家蚕丝表面的菌落数明显少于对照组；转基因家蚕丝在紫外光的激发下发出绿色荧光，表明通过基因打靶gfp-cec已与fib-L融合并表达。　　为了探讨提高实用品种的产丝水平和叶丝转化率的可能性，将后部丝腺特异性表达Gal4的Fil-Gal4/3XP3-DsRed2转基因家蚕系与实用品种菁松回交6代，获得Fil-Gal4转基因家蚕菁松系统；将带有UAS-Ras1CA元件的UAS-Ras1CA/3XP3-EGFP转基因家蚕系与实用品种皓月回交6代，获得UAS-Ras1CA转基因家蚕皓月系统。将Gal4菁松系与UAS皓月系杂交，得到在后部丝腺特异性表达Ras1CA的转基因实用品种Fil-Gal4-菁松×UAS-Ras1CA-皓月，调查结果显示，与菁松×皓月相比，转基因家蚕的的后部丝腺重和蚕丝产量分别提高了11%、1.3%，叶丝转化率提高0.57%。实时定量PCR检测结果显示Fil-Gal4-菁松×UAS-Ras1CA-皓月后部丝腺Ras1 mRNA水平提高了4.08倍。