论文部分内容阅读
耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)是生鲜乳生产中引起人类食源性感染的重要致病菌之一,该菌广泛存在于奶牛养殖环境中,通过多种途径污染牛乳,严重危害人畜健康。本研究以5%绵羊血琼脂平板为采样基质,采集山西省某奶牛养殖小区和挤奶间的空气、圈舍围栏、奶牛鼻腔、肛门、乳头、饲料、粪便,挤奶器、牛乳以及小区外周居民区空气样本,通过细菌分离、染色镜检、选择纯化培养、16S rRNA保守序列分析、MRSA表型鉴定及mecA基因扩增检测筛选MRSA,并测定其对14种抗生素药物的敏感性和耐药分布,利用mecA基因序列比对和ERIC-PCR指纹图谱分析技术分析了MRSA在生鲜乳生产环节中的遗传相似性,探讨生鲜乳生产中各环节MRSA的耐药情况及散播特点,以期为生鲜乳的安全生产提供依据。结果表明:1、在生鲜乳生产环节中采集样本721份,分离获得184株金黄色葡萄球菌,平均检出率为25.5%,其中生鲜乳、挤奶车间、养殖场环境和周边居民区空气中的检出率分别为42.9%,22.4%,18.5%和31.8%。2、从184株金黄色葡萄球菌中鉴定出MRSA表型耐药菌株94株,mecA基因阳性菌株90株,MRSA检出率为48.9%,其中牛场环境、用具及牛肛门检出率为90%～52.6%,挤奶间环境、用具及乳头检出率为47.1%～62.5%,牛乳检出率32.9%,养殖场周边居民区空气检出率为49.5%。3、各采样点MRSA表现不同程度的耐药性和多重耐药性,其中对青霉素G的耐药情况最为严重,耐药率为95.6%,其次是利福平、克林霉素、呋喃妥因、红霉素的耐药率较高,耐药率分别为95.6%、89%、86.8%、84.6%、80.2%,多重耐药率为98.9%(89/90),多重耐药种数主要集中在6耐～8耐之间。4、mecA基因序列比对显示,各采样点MRSA的mecA耐药基因同源性为95.22%,按同源关系分为5大分支;其中2株乳检测株分别与牛乳头、牛鼻腔mecA耐药基因序列同源性在99%以上,同源关系分别对应2分支;3株乳分离株与挤奶车间空气、挤奶器同源性在98%以上,同源关系在同一分支上;以上提示牛乳中的MRSA来源于牛场环境和挤奶车间。5、ERIC-PCR同源性关系分析显示,90株检测菌株的DNA指纹图谱相似性在52%-100%之间,以65%为界分为4大分支,其中乳中的MRSA分离株与牛场环境(15株)、挤奶车间环境(3株)、居民区(1株)的同源性在90%以上;饲料与牛体(4株)、牛运动场空气(1株)、乳及挤奶环境(4株)的同源性在90%以上;围栏(6株)与牛体的同源性在90%以上;挤奶间(6株)与牛鼻腔、肛门的同源性在90%以上;居民区空气(2株)与牛乳头的同源性在85%以上;牛鼻腔一株MRSA耐药基因的亲缘关系与其他环境较远,但与1株饲料分离株的同源性在90%以上,与2株乳分离株的同源性在85%以上,亲缘关系在同一分支;以上提示牛场内外环境中的MRSA可通过牛体和空气气溶胶散播,污染生鲜乳。