深圳市宝安区不孕症患病率现况调查及端粒酶活性与雌、孕激素受体在种植窗期子宫内膜中的表达研究

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目的:  1)分析深圳市宝安区育龄期女性不孕症的流行病学特点及相关影响因素,为临床防治提供指导。2)了解不孕症女性心理健康状况并探讨相关影响因素,为改善不孕症女性患者的心理健康提供依据。3)了解端粒酶和雌、孕激素受体在复发性流产患者及反复种植失败患者子宫内膜中的表达情况,从子宫内膜容受性的角度探讨复发性流产及反复种植失败的发生原因。  方法:  1)在2014年1月至12月间随机抽取抽取宝安区六个街道24个社区内结婚1年以上未避孕的育龄期女性进行问卷调查,分析不孕症的发病情况及影响因素。2)选取2014年4月~2015年9月在深圳市宝安区妇幼保健院生殖健康科就诊的100例不孕症女性与同期来院行健康体检的100例正常对照女性,采用焦虑自评量表(SAS)与抑郁自评量表(SDS)及一般情况问卷进行调查。3)选择2014年6月至2015年6月在深圳市宝安区妇幼生殖科就诊的复发性流产患者35例及正常妊娠女性31例作为研究对象,采用宫腔镜检查、化学发光法、免疫组化法和实时荧光PCR法,分别检测种植窗期宫腔及子宫内膜形态、血清雌二醇、孕酮水平以及子宫内膜中端粒酶含量。4)选择2014年11月至2015年6月在深圳市宝安区妇幼生殖科就诊的试管婴儿反复种植失败者(RIF)30例及正常妊娠女性30例作为研究对象,采用经阴道超声B超、化学发光法、免疫组化法和实时荧光PCR及蛋白质印迹法,分别检测种植窗期子宫内膜的厚度、血清雌二醇和孕酮的水平以及子宫内膜中端粒酶、雌激素受体、孕激素受体含量。  结果:  1)深圳市宝安区育龄期已婚女不孕症患病率为8.93%,原发不孕患病率为3.33%,继发不孕患病率为5.60%;宝安中心区不孕症患病率为5.95%,其中原发不孕患病率1.70%,继发不孕患病率4.25%;宝安工业区不孕症患病率11.59%,其中原发不孕症患病率4.79%,继发不孕患病率6.80%。2)宝安工业区不孕症患病率及原发不孕的患病率均高于中心区;宝安中心区不孕症患病人数占总不孕症人数的31.34%,其中原发不孕占28.57%,继发不孕占71.43%;宝安工业区不孕症患病人数占总不孕症人数的68.66%,其中原发不孕占41.30%,继发不孕占58.7%;宝安中心区不孕症构成继发不孕为主;宝安工业区不孕症构成以原发不孕为主。3)在社会学特征中,影响宝安区女性不孕症患病率的因素有:结婚年龄、婚龄、教育程度及月经济收入(P<0.05),其中婚龄≥3年(OR=0.55)及教育程度大专以下(OR=0.67)成为不孕症的保护因素(P<0.05),两个因素在宝安中心区及工业区之间比较无统计学差异(P>0.05);结婚年龄≥25岁(OR=2.19)、月经济收入<5000元(OR=1.85)是不孕症患病率的危险因素(P<0.05);在宝安工业区,自由职业或无业此因素对不孕症的影响高于中心区,(OR=1.98,P<0.05)。4)在纳入暴露的危险因素中,影响宝安区总体不孕症发生的因素有:BMI、≥2次人流史、月经不规律、生殖道感染、肿瘤及手术、子宫内膜异位症、生活不规律、精神压力大(P<0.05);影响中心区不孕症发生的因素有:BMI、≥2次人流史、月经不规律、生殖道感染、肿瘤及手术、子宫内膜异位症、生活不规律、精神压力大,(P<0.05);影响工业区不孕症发生的因素有:BMI、≥2次人流史、月经不规律、生殖道感染、肿瘤及手术、子宫内膜异位症、生活不规律、精神压力大,以及毒物接触史(P<0.05);运动成为影响不孕症发生的保护因素。5)经逐步回归得出结果:影响宝安区女性不孕症发生的危险因素有:年龄≥25岁、生活在宝安工业区、月收入<5000元、BMI≥24、≥2次人流史、月经不规律、生殖道疾病、子宫内膜异位症、毒物接触史、生活不规律及精神压力大;保护因素有婚龄≥3年,教育程度为大专以下及经常运动。6)不孕症组抑郁发生率为44%(44/100),焦虑发生率39%(39/100),健康体检组抑郁的发生率为7%(7/100),焦虑发生率为8%(8/100),不孕症组抑郁/焦虑发生率均高于对照组,比较有统计学差异(P<0.05);7)不孕组抑郁评分(SDS)和焦虑评分(SAS)均明显高于健康体检组,有统计学有差异(P<0.05);8)在不孕女性的社会因素研究中,年龄、职业、月收入以及教育程度均对不孕症女性抑郁、焦虑的评分有影响(P<0.05);年龄>35岁者在抑郁症状上最明显,年龄30~35岁者在焦虑症状上最明显;有固定工作者、月收入≥5000元以及教育程度为大专以上者的抑郁和焦虑评分均高于相应的自由职业者、月收入<5000及大专以下教育程度者(P<0.05);9)在对不孕女性自身疾病的相关因素研究中,不孕时间、BMI、月经情况、治疗时间及人工助孕均对不孕症女性抑郁、焦虑的评分有影响(P<0.05),不孕时间5年以上抑郁症状最严重,不孕时间3~5者焦虑症状最严重,不孕时间越长,SDS及SAS评分越高(P<0.05);BMI≥24者焦虑症状明显,有统计学差异(P<0.05),但无抑郁症状之间的差异(P>0.05);月经异常、治疗时间≥3年以及人工助孕的不孕症女性抑郁、焦虑状态明显高于其相应的各组,统计学有差异(P<0.05);10)对不孕女性家庭因素的研究中,家庭关系、性生活、生育渴望度对不孕症女性抑郁、焦虑的评分有影响,有统计学差异(P<0.05);家庭关系不和谐、性生活不正常以及生育渴望度非常的不孕症女性,其抑郁、焦虑状态明显高于其相应的各组,比较有统计学差异(P<0.05);11) RSA患者中宫腔镜下子宫内膜成差型内膜占57.2%,腺体与间质反应不同步占40.0%,在正常妊娠组中83.8%的子宫内膜成佳型子宫内膜,87.1%腺体与间质反应同步,比较均有统计学差异(P<0.05);12)种植窗期端粒酶活性与E2/P比值呈线性相关(r=0.9475),RSA组种植窗期子宫内膜端粒酶活性较正常妊娠组明显增强(P<0.05);13)在免疫组化比较中,种植窗期子宫内膜中的端粒酶在腺上皮细胞及间质细胞均有表达,两组比较在腺上皮细胞表达上无差异(P>0.05),但在间质细胞中,RSA组端粒酶活性较正常妊娠组增强(P<0.05)。14)种植窗期子宫内膜雌激素受体(ER)在腺上皮细胞及间质细胞均有表达,两组比较腺上皮细胞及间质细胞中表达均无差异(P>0.05);15)子宫内膜中孕激素受体(PR)在腺上皮细胞及间质细胞均有表达,在RSA组中腺上皮细胞及间质细胞PR均较正常妊娠组表达增强,有统计学差异(P<0.05);16)复发性流产患者中种植窗期子宫内膜中的端粒酶活性表达增强,孕激素受体表达下降,较正常组比较均有统计学意义(P<0.05),种植窗期子宫内膜中的端粒酶活性表达与ER之间无线性相关性,(R2=0.011,P=0.674),但与PR之间成线性正相关(R2=0.913,P=0.000);17)通过RT-PCR检测发现,RIF患者在种植窗期子宫内膜中的端粒酶mRNA含量较正常妊娠组明显升高,而ER-α含量低于正常妊娠组,均有统计学差异(P<0.05),PR含量在两组中比较无差异(P>0.05);16)端粒酶mRNA表达与ER-α的表达有显著相关(r2=0.5556,P<0.0001),但与孕激素受体表达无相关(r2=0.00868,P>0.05);18)通过Western-blot法进一步在蛋白水平上定量端粒酶及ER-α含量发现,RIF患者子宫内膜中端粒酶含量较正常妊娠组明显升高,ER-α的含量在RIF组的子宫内膜中表达下降,均有统计学差异(P<0.05);在蛋白水平上的端粒酶表达与ER-α的表达成显著相关(r2=0.6234,P<0.0001);19)在免疫组化试验中,两组种植窗期子宫内膜雌激素受体在腺上皮细胞及间质细胞中均有表达,ER-α在RIF组中表达下降,端粒酶活性表达在RIF组中明显增强。  结论:  1)对本地区育龄期女性不孕症的流行病学调查,可以了解本地区发病特征及影响因素,从而为临床上的预防和治疗提供思路。2)不孕症女性的抑郁/焦虑发生率高,随着年龄的增加、不孕时间及治疗时间的延长、人工助孕的参与使得不孕症女性抑郁/焦虑症状愈加明显,应充分重视不孕女性的心理健康,并在不孕症的诊疗过程中充分做好与患者心理沟通工作,改善并提高不孕女性的心理健康水平。3)种植窗期富腔镜下子宫内膜形态有助于了解及初步判定复发性流产患者子宫内膜容受性,对其病因查找上提供依据;4)复发性流产患者血清孕酮水平影响孕激素受体的表达,在种植窗期,子宫内膜中的孕激素受体表达上调及端粒酶活性表达的增强可能改变了子宫内膜的容受性,是导致胚胎种植后流产的可能原因之一。5)在反复种植失败患者的种植窗期子宫内膜中,无论是在核酸、蛋白还是在细胞水平上,雌激素受体表达下调并伴随着端粒酶活性增强可能改变了子宫内膜的容受性,推断有可能在种植窗期提供了不健康的内膜状态而引起种植失败。6)端粒酶表达增强是复发性流产及反复种植失败二者中反复性的共通点,孕激素受体表达的上调表现在复发性流产患者中,而雌激素受体表达的下调表现在反复种植失败患者中,不同状态下的雌、孕激素受体的变化可能引起不同的妊娠结局。种植窗期子宫内膜中雌、孕激素受体水平及端粒酶活性检测有助于进一步评价复发性流产及反复种植失败患者的子宫内膜容受性,从而为改善及治疗不孕不育提供依据。
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