产肉品质一直是我国家畜生产的重要经济指标,而肌纤维作为构成肌肉的基本单位与肉品质有着密切的联系。肌纤维是由单核肌细胞向多核肌细胞融合最终形成的,因此研究肌细胞分子发育机制对于改善肌肉品质有重要意义。继发现microRNA参与多种调节机制后,另一种新型RNA-长链非编码RNA (LncRNA)开始进入人们视角,研究表明,它的调控机制比microRNA更加多样和复杂,参与的调控范围也更加广泛。在整个基因组中长链非编码RNA (LncRNA)大量存在,编码蛋白的基因只占很少的一部分,这也间接说明大量的LncRNA是以非编码的形式发挥对编码蛋白基因的调控。目前,针对LncRNA-Meg3(maternally expressed3)的研究主要集中在肿瘤中,研究表明,该基因表达量的增加能有效抑制癌细胞增殖,但Meg3基因对肌细胞的影响还没有相关报道。虽然对LncRNA的研究日益增多,但是相关的机制仍不是很清楚,因此,研究LncRNA具体的功能机制就显得尤为重要。本文采用注射蛇毒的方法构建肌肉损伤模型,通过组织切片和real time PCR对肌肉的修复过程进行分析。由于转录本数量过多,所以针对不同转录本区域设计特异引物,用real time PCR检测表达量,并结合前期LncRNA芯片结果筛选出核心功能转录本。构建过表达载体并设计干扰片段转染C2C12细胞,通过芯片分析、GO分析筛选到过表达后出现下调并且与细胞增殖相关的基因,利用real time PCR的方法验证芯片结果。设计寡聚核苷酸探针进行RNA-FISH原位杂交,确定目的基因在细胞中的表达位置,体外转录制作RNA探针,利用pulldown技术将探针与细胞裂解物进行孵育调取互作蛋白确定靶基因。结果表明,肌肉损伤修复过程中,肌细胞在前期受到严重损伤,开始出现肌纤维溶解,但是4day的时候新的肌肉卫星细胞开始出现,表明肌肉开始进行修复。Meg3基因在肌肉修复过程中表达量呈显著上升,所以推测Meg3参与肌肉损伤的修复与重建,并发挥了重要作用。根据real timePCR和芯片结果,筛选到pat-1转录本。过表达载体和敲低片段分别转染C2C12细胞,经芯片分析筛选到过表达pat-1基因后出现下调的基因,通过GO分析从中挑选出7个与细胞增殖相关的基因进行定量验证,结果显示过表达pat-1转录本对C2C12细胞的增殖起到了抑制的作用,与文献报道的Meg3基因抑制肿瘤细胞增殖相符。利用RNA-FISH荧光原位杂交技术确定了pat-1转录本在细胞质、核都表达,主要在细胞质表达,说明Meg3基因参与到了细胞质相关的生物合成,并且经过pulldown技术筛选到了与靶基因互作的蛋白。本实验对LncRNA功能的研究提供了一个很好的实验基础和理论依据。