【摘 要】
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红树莓为蔷薇科悬钩子属植物,果实营养丰富,有“生命之果”的美誉,与其富含具有生物活性的鞣花酸密切相关。鞣花酸是一种多酚二内酯,具有非常好的药用和保健价值,红树莓含有
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红树莓为蔷薇科悬钩子属植物,果实营养丰富,有“生命之果”的美誉,与其富含具有生物活性的鞣花酸密切相关。鞣花酸是一种多酚二内酯,具有非常好的药用和保健价值,红树莓含有丰富的鞣花酸,随着红树莓种植发展规模不断的扩大,开展红树莓鞣花酸的深入研究对树莓综合开发利用具有重要的意义。本论文系统研究了微波辅助提取红树莓鞣花酸,利用X-5大孔树脂吸附法分离纯化红树莓鞣花酸,并通过HPLC-MS和粒度仪鉴定出较高纯度红树莓鞣花酸,进一步探究了红树莓鞣花酸对肺癌细胞A549增殖凋亡的影响及抗氧化抗癌之间的相关性。主要研究结果如下:(1)利用微波辅助法提取红树莓鞣花酸,经过单因素试验和响应面优化设计得出鞣花酸最佳提取工艺,与传统提取方法进行提取率及抗氧化性的比较。结果表明:最佳提取条件为:提取时间1.8 min,提取温度60℃,乙醇浓度50%,液料比19:1,微波功率411 W,此条件下鞣花酸提取含量为82.75 mg/100g,相比于传统法提高了20.42%,同时自由基清除能力显著高于传统盐酸水解法所得鞣花酸,说明微波提取法优于传统提取法。(2)利用大孔树脂吸附法分离纯化红树莓鞣花酸,并利用HPLC-MS和粒度仪鉴定出较高纯度红树莓鞣花酸。结果表明:X-5树脂纯化红树莓鞣花酸的最佳吸附工艺参数为:上样浓度1.0mg/m L,径高比1:14,上样量80 m L,样液p H=5的条件进行动态吸附,吸附率为92.76%,吸附量为3.37mg/g;最佳解吸工艺参数为:水洗体积为500m L,再用200 m L的50%乙醇溶液,以1.5BV/h流速洗脱,解吸率为88.38%,回收率为83.56%。利用HPLC-MS和粒度仪对纯化后鞣花酸分析可知,纯化后鞣花酸色谱峰面积显著增大,并且纯化后的鞣花酸的粒径远小于粗鞣花酸的粒径,说明纯化后的粉体更加细腻、均匀。(3)利用MTT法、凋亡检测和划痕试验三方面进行红树莓鞣花酸对肺癌细胞A549作用的评价,探究红树莓鞣花酸的抗肺癌细胞A549的活性。结果表明:MTT法显示200μg/m L红树莓鞣花酸作用肺癌细胞A549 48 h后,细胞抑制率达到84.05%,说明红树莓鞣花酸能有效地抑制肺癌细胞A549增殖。凋亡结果显示200μg/m L鞣花酸处理组的肺癌细胞A549凋亡率为37.9%,并且凋亡率呈浓度依赖性,综上可以说明红树莓鞣花酸可以通过抑制肺癌细胞A549增殖和促进其凋亡进而抑制肺癌细胞A549的活性。划痕结果显示红树莓鞣花酸能显著降低肺癌细胞A549迁移率,并且迁移率呈浓度依赖性,200μg/m L鞣花酸处理组的肺癌细胞A549在24h后迁移率仅为26.2%。通过建立相关性可知红树莓鞣花酸体外抗氧化和抗肺癌细胞A549增殖活性之间显著呈正相关。
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