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美罗培南是第二代碳青霉烯类抗生素,抗菌谱广,对革兰阳性菌、阴性菌均具有很强的抗菌作用,主要经肾脏排泄,常用于治疗肺炎、妇科感染、尿路感染、脑膜炎、败血症等严重感染。对于严重感染或脓毒症的患者,急性肾损伤(AKI)发生率较高,针对AKI的治疗中,具备良好的生物相容性、对液体清除缓慢而持续等特点的连续肾脏替代治疗(CRRT),成为了最优先考虑的治疗方式。由于CRRT会显著影响大多数药物在机体内的药物代谢动力学特征,因此研究CRRT时美罗培南的药物代谢动力学具有重要的临床意义。目的:1建立人血浆中美罗培南的LC-MS/MS测定方法;2探讨美罗培南给药剂量相同时,不同的CRRT治疗剂量对美罗培南药代动力学影响;3探讨肌酐清除率小于50ml/min时,美罗培南在CRRT患者与非CRRT患者中的药代动力学差异;4探讨肾功能对美罗培南在非CRRT患者中的药代动力学影响。方法:1 LC-MS/MS法测定人血浆中美罗培南浓度1.1色谱条件色谱柱:Kinetex HILIC colum(100×2.1 mm,2.6um)(Phenomenex,USA);流动相:A:0.2%甲酸,8mM醋酸铵水溶液B:乙腈;流速:0.4ml/min;进样量:5μl;柱温:40℃;梯度洗脱。1.2质谱条件采用电喷雾离子源,正离子模式,多离子反应监测(MRM)。质谱参数:IS:5500V;离子源温度:500℃;GS1:50 psi;GS2:50 psi;CUR:25psi;美罗培南:m/z 384.2→m/z 141.1,DP:65V,CE:25 V;哌唑嗪:m/z384.1→m/z247.0,dp:100v,ce:45v。1.3血浆样品预处理精密量取血浆100μl于空白离心管中,加入10μl哌唑嗪内标溶液,再加入沉淀剂乙腈800μl,涡旋3min,离心(15000g,10min),取上清液500μl,离心(15000g,3min),留取上清液进样测定。2美罗培南在CRRT患者与非CRRT患者中药代动力学研究2.1纳入患者及美罗培南用药纳入患者为2016年收治于河北医科大学第四医院icu病房应用美罗培南的患者,16例CRRT患者,美罗培南给药剂量为1g,q12h;20例非CRRT患者,美罗培南给药剂量为1g,q8h和1g,q12h。2.2标本采集与保存2.2.1CRRT患者标本采集与保存CRRT患者非首剂给药后的0h、0.5h,1h、1.5h、2h、4h、6h、8h、10h、12h采集滤器前血标本2ml,离心后用冻存管保存,储存于-70℃冰箱。2.2.2非CRRT患者标本采集与保存非CRRT患者体内药物达稳态后,于给药后0h、1h、2h、4h和6h采集血标本2ml,离心后用冻存管保存,储存于-70℃冰箱。2.3数据处理采用winnonlin6.4和spss21.0对美罗培南血浆药物浓度(CRRT患者采集的滤器前药物浓度根据换算系数得血浆药物浓度)进行处理,winnonlin6.4采用非房室模型,计算方法选择线性梯形线性内插法(ltli);spss21.0处理数据时,数据采用mean±sd表示,两组间比较采用t检验,多组间比较经方差齐性检验后用单因素方差分析,组间两两比较采用dunnett-t检验。结果:1lc-ms/ms法测定人血浆中美罗培南浓度血浆中美罗培南及内标哌唑嗪在该方法中专属性良好,血浆中内源性物质对美罗培南浓度测定无干扰;美罗培南在0.5μg/ml-50μg/ml范围内线性关系良好,最低检测限为0.5μg/ml;低(1μg/ml)、中(8μg/ml)、高(40μg/m)三种浓度提取回收率均在99%-106%之间,日内,日间rsd%均小于8%,最低定量限rsd%小于20%,美罗培南的冻融稳定性及储藏于-70℃条件下60天稳定性、自动进样器放置12h及在室温、4℃条件下放置4h的稳定性,基质效应及血浆稀释10倍稳定性均符合生物样品定量分析方法验证指导原则。2美罗培南在CRRT患者与非CRRT患者中药代动力学研究2.1美罗培南在给药剂量为1g,q12h,不同CRRT治疗剂量时的药代动力学美罗培南给药剂量为1g,q12h,CRRT治疗剂量为25ml/kg/h和35ml/kg/h的t?分别为(3.31±0.63)h、(2.63±0.38)h,vd分别为(23.17±6.16)l、(16.82±3.68)l,以上两参数两组比较均有统计学差异,其他参数如cmax、auc和cl两组比较均无统计学差异。2.2肌酐清除率小于50ml/min时,美罗培南在CRRT患者与非CRRT患者体内的药代动力学CRRT治疗剂量为25ml/kg/h患者与非CRRT患者的药代动力学参数进行比较,cmax降低、auc减少、vd减少、cl增加,且均有统计学差异;CRRT治疗剂量为35ml/kg/h患者与非CRRT患者进行药代动力学参数比较,t?缩短、auc减少、vd降低、cl增加,且均有统计学差异。2.3美罗培南在不同肾功能状态的非CRRT患者的体内药代动力学患者按照慢性肾脏疾病分期进行分组,肌酐清除率在60-90ml/min和50-60ml/min范围内的非CRRT患者分别与肌酐清除率>90ml/min的非CRRT患者相比较,t?均延长,auc均增大,vd均增大,cl均减少,以上参数比较均有统计学差异。结论:1本研究建立了lc-ms/ms法测定人血浆中美罗培南药物浓度,该方法准确、简便、专属性好,可用于美罗培南的药代动力学研究。2美罗培南给药剂量为1g,q12h,CRRT治疗剂量为35ml/kg/h时,患者体内美罗培南t?缩短、vd降低,且与CRRT治疗剂量为25ml/kg/h组比较均有统计学差异(p<0.05);auc、cl均无统计学差异;提示CRRT治疗剂量为35ml/kg/h时,加快了美罗培南的代谢。3肌酐清除率小于50ml/min,美罗培南给药剂量为1g,q12h时,与非CRRT患者比较,CRRT对美罗培南药代动力学有显著影响,CRRT作为血液净化的一种方式,使得美罗培南体内代谢加快,增加了药物清除。4美罗培南用药剂量为1g,q8h时,肾功能不全患者对美罗培南的代谢减慢,清除率明显降低,用药时应根据患者肾功能调整美罗培南给药剂量,防止不良反应发生。