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第一部分经鼻给药tPA突变体改善小鼠缺血性脑卒中后长期神经损伤的作用目的:研究小鼠缺血性脑损伤(MCAO)模型中,术后给予多剂量tPA突变体观察其对小鼠短期行为学的影响,并选取最优剂量,研究其对小鼠术后长期行为认知功能恢复的作用。方法:1.取8-12周龄的C57/BL6雄性小鼠,随机分为5组,分别为四组不同剂量(0.25pg/g,0.5μg/g,1.0μg/g,2.0μg/g)经鼻给药给药组以及PBS经鼻给药对照组,对所有实验小鼠行大脑中动脉栓塞术(MCAO)。术后在各个时间点检测各项行为学,并于14天处死小鼠取出脑组织,检测梗死病灶体积及白质损伤情况。2.取8-12周龄的C57/BL6雄性小鼠,随机分为两组,分别为治疗组以及PBS对照组,对两组小鼠行大脑中动脉栓塞术(MCAO),两组小鼠术后行35天行为学检测各项行为学,检测脑萎缩体积。结果:1.MCAO术后14天短期行为学,给药组行为学表现呈剂量相关性,0.5μg/g的给药组结果明显优于对照组,脑损伤程度降低。2.MCAO术后35天长期行为学,治疗组行为学检测结果明显优于对照组,脑萎缩程度降低。结论:1.tPA突变体对MCAO术后小鼠的脑保护作用呈剂量依赖效应;2.tPA突变体对MCAO术后小鼠的长期运动及认知功能具有显著保护作用.第二部分经鼻给药tPA突变体改善小鼠缺血性脑卒中后长期神经损伤的作用机制目的:通过分析白质的结构性与功能性变化,并利用基因敲除小鼠,研究tPA突变体改善缺血性脑卒中后神经损伤的作用机制。方法:1,取第一部分实验中MCAO术后35天的脑组织,分为治疗组与对照组,进行冰冻切片后染色,染色包括MAP2,SMI32/MBP。2,取8-12周龄的C57/BL6雄性小鼠,随机分为两组,每组6只,分别为治疗组以及PBS对照组进行脑弥散张量检测,对两组小鼠行大脑中动脉栓塞术(MCAO),术后于2天行T2WI扫描,以确保手术的成功,后分别于14天,21天行在体DTI扫描,并于35天后处死小鼠,取出完整脑组织,进行离体DTI扫描。3,取8-12周龄的C57/BL6雄性小鼠,随机分为两组,每组6只,分别为治疗组以及PBS对照组进行电生理测试,对两组小鼠行大脑中动脉栓塞术(MCAO),术后于35天处死小鼠,取出脑组织切片行电生理测试。4,取8-12周龄的C57/BL6雄性小鼠6只,OPC-PPARY基因敲除小鼠6只,同时经鼻给药PBS溶液,对两组小鼠行大脑中动脉栓塞术(MCAO),术后各个时间点检测各项行为学,检测脑萎缩体积。结果:1.MCAO术后35天给药组的SMI32/MBP的荧光度比值在外囊区显著低于对照组。2.MCAO术后2天的T2WI中显示,治疗组与对照组的脑损伤程度未见明显差异,术后晚期21天时,治疗组Fractional Anisotropy(FA)值明显高于对照组。3.MCAO术后35天电生理检测中,治疗组脑片电刺激后反应优于对照组结果。4,MCAO术后35天长期行为学中,基因敲除小鼠表现明显比野生型小鼠差。结论:MCAO术后经鼻给药tPA突变体能明显改善白质损伤情况,有利于保存白质结构性及功能性的完整;通过基因敲除鼠去除内源性tPA的相关受体显著抑制小鼠MCAO后神经功能恢复。