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目的构建含增强型绿色荧光蛋白(Enhanced Green Fluorescence Protein, EGFP)基因的重组表达质粒pEGFP-Cl-PPARy,观察小鼠PPARy基因在乳腺癌MDA-MB-231细胞中的表达、定位及对其细胞周期的影响。方法从小鼠新鲜肝脏组织提取总RNA, RT-PCR扩增PPARγ基因编码区序列,将编码区序列片段纯化,连接进入pGEM-T-Easy克隆载体,转化Top10感受态大肠杆菌,氨苄青霉素及蓝白斑筛选、酶切及DNA测序鉴定得到阳性克隆。以上述载体为模板采用亚克隆技术,将PPARy基因编码区序列片段与pEGFP-C1空载体分别双酶切,纯化后连接构建重组表达质粒pEGFP-C1-PPARγ,转化Top10感受态大肠杆菌,卡那霉素筛选、酶切及DNA测序鉴定得到阳性克隆。分别提取pEGFP-C1及pEGFP-C1-PPARγ质粒；采用脂质体介导法转染MDA-MB-231细胞,real-time PCR和western-blot验证其mRNA和蛋白的表达,荧光显微镜观察增强型绿色荧光蛋白亚细胞定位,并应用流式细胞术检测对细胞周期的影响。结果酶切与测序证实克隆质粒中含有小鼠PPARγ基因编码区；酶切和测序证实重组真核表达质粒中含有小鼠PPARγ基因编码区序列且插入方向正确；荧光显微镜观察转染了pEGFP-C1及pEGFP-C1-PPARy质粒的乳腺癌MDA-MB-231细胞中可以看到增强型绿色荧光蛋白的表达,EGFP亚细胞定位在全细胞,PPARγ主要定位在细胞核,real-time PCR和western-blot结果表明重组PPARγ在乳腺癌MDA-MB-231细胞中成功表达。流式细胞仪检测PPARγ-GFP、GFP和MDA-MB-231三组细胞,S期的细胞比例分别为(42.40±0.14)%、(18.51±0.23)%和(15.10±0.28)%(P<0.01),Go／G1期的细胞比例分别为(51.71±0.63)%、(72.71±0.60)%和(75.32±0.64)%(P<0.01)。结论成功构建了PPARγ基因编码区克隆载体及含绿色荧光蛋白的pEGFP-C1-PPARγ真核表达载体；PPARγ基因在乳腺癌MDA-MB-231细胞中成功表达,弥散分布于胞质,主要集中表达于胞核；过表达PPARγ基因能将乳腺癌MDA-MB-231细胞阻滞于S期。