论文部分内容阅读
目的：
多溴二苯醚（PBDEs）是连接有两个或多个溴的一组阻燃剂，已广泛应用于许多商业产品中。近年来，多溴二苯醚的健康风险引起了全球的关注。PBDEs可能破坏内分泌系统，具有神经发育毒性、致畸性和潜在的致癌性。尽管在某些国家/地区限制了PBDEs的使用，但尚未在全球范围内逐步淘汰它们。2009年，PBDEs被联合国环境规划署（UNEP）正式确定为一类新型的持久性有机污染物（POPs）。PBDEs光降解为4-溴二苯醚（BDE3），它也是内分泌干扰物。BDE3是否在产后发育过程中损害肾上腺皮质细胞功能仍然未知。由于肾上腺是关键的内分泌器官，肾上腺是下丘脑-垂体-肾上腺轴的一部分。它与交感神经系统一起将大脑与周围环境连接起来，并介导对身体和情绪压力的反应。因此，肾上腺虽然只是肾脏上方很小的一对器官，但在内分泌系统中起着核心的作用。肾上腺皮质由球状带（zona glomerulosa，zG）、束状带（zona fasciculata，zF）和网状带（zona seticularis，zS）组成，是几种类固醇激素的主要生产者，易受有毒物质的影响。本课题的目的是研究BDE3对肾上腺皮质细胞功能的影响。
方法：
BDE3体内实验：取24只28日龄雄性SD大鼠，随机分成4组：0mg/kg/天（玉米油对照组）、50mg/kg/天（低剂量BDE-3组）、100mg/kg/天（中剂量BDE3组）和200mg/kg/天（高剂量BDE-3组），每组6只。从35日龄开始连续21天灌胃给予BDE-3（0、50、100和200mg/kg/天），记录动物体重变化。于56日龄时，处死动物，收集血清，采用ELISA法测量血清醛固酮（ALDO）和皮质酮（CORT）、促肾上腺皮质激素（ACTH）水平。取肾上腺，称重，快速冰冻一侧肾上腺，取部分组织提取RNA，经RT-qPCR法检测肾上腺细胞Mc2r,Scarb1,Star,Cyp11a1,Cyp21,Hsd3b1,Cyp11b1,Cyp11b2,Hsd11b1,Nr5a1,Igf1,Agtr1,Hsd11b2的mRNA水平；另取部分组织提取蛋白，经Western blot检测肾上腺细胞蛋白SCARB1,StAR,CYP11B1,CYP11B2,CYP21,NR5A1,ACTB以及信号通路蛋白PGC-1?、SIRT1、CREB、pCREB、AMPK、pAMPK的水平；用Bouin液固定另一侧肾上腺，脱水，包埋，石蜡切片，用免疫组织化学法染色CYP11B1（肾上腺束状带细胞特异性生物标记物）和CYP11A1（肾上腺细胞的生物标记物），测定肾上腺细胞其蛋白表达水平。
结果：
体内实验表明，BDE3不影响大鼠体重及肾上腺重量，也不会改变zG和zF区域的百分比。与对照组相比，200mg/kg的BDE3明显增加了血清水平ALDO和CORT水平（P＜0.05），但其不影响血清ACTH水平（P＞0.05）。RT-qPCR结果显示，100mg/kg和200mg/kg的BDE3显著上调Cyp11b1的表达，而以200mg/kg的浓度BDE3增加了Scarb1,Star,Cyp11b2,Cyp21和Nr5a1的表达。BDE3处理后，Mc2r,Cyp11a1,Hsd3b1,Hsd11b1,Hsd11b2,Igf1,和Agtr1转录结果没有改变。Western blot结果显示，BDE-3显著改变了SACRB1,StAR,CYP11B1,CYP11B2,CYP21,和NR5A1蛋白的水平，并使其与各自的mRNA水平平行。使用半定量免疫组织化学染色法测量每个肾上腺细胞的CYP11A1和CYP11B1蛋白水平，显示在100和200mg/kg时增加CYP11B1的密度，而不会影响CYP11A1。同时，Western blot激酶途径结果也显示，在200mg/kg的剂量下，BDE3增加了PGC-1?的水平，而没有影响SIRT1的水平。200mg/kg的BDE3在不影响总AMP活化蛋白激酶（AMPK）水平的情况下降低了磷酸化AMP活化的蛋白激酶（pAMPK）的水平，因此导致200mg/kg的BDE3的pAMPK/AMPK的比例降低。BDE3降低了总CREB的水平，而不影响200mg/kg的BDE3的磷酸化CREB（pCREB）的水平，因此导致高剂量组的pCREB/CREB的比例增加。
结论：
青春期雄性大鼠暴露于BDE3引起肾上腺功能异常。BDE3对肾上腺细胞功能的影响可能通过降低AMPK的磷酸化和增加CREB的磷酸化来刺激肾上腺细胞功能。
多溴二苯醚（PBDEs）是连接有两个或多个溴的一组阻燃剂，已广泛应用于许多商业产品中。近年来，多溴二苯醚的健康风险引起了全球的关注。PBDEs可能破坏内分泌系统，具有神经发育毒性、致畸性和潜在的致癌性。尽管在某些国家/地区限制了PBDEs的使用，但尚未在全球范围内逐步淘汰它们。2009年，PBDEs被联合国环境规划署（UNEP）正式确定为一类新型的持久性有机污染物（POPs）。PBDEs光降解为4-溴二苯醚（BDE3），它也是内分泌干扰物。BDE3是否在产后发育过程中损害肾上腺皮质细胞功能仍然未知。由于肾上腺是关键的内分泌器官，肾上腺是下丘脑-垂体-肾上腺轴的一部分。它与交感神经系统一起将大脑与周围环境连接起来，并介导对身体和情绪压力的反应。因此，肾上腺虽然只是肾脏上方很小的一对器官，但在内分泌系统中起着核心的作用。肾上腺皮质由球状带（zona glomerulosa，zG）、束状带（zona fasciculata，zF）和网状带（zona seticularis，zS）组成，是几种类固醇激素的主要生产者，易受有毒物质的影响。本课题的目的是研究BDE3对肾上腺皮质细胞功能的影响。
方法：
BDE3体内实验：取24只28日龄雄性SD大鼠，随机分成4组：0mg/kg/天（玉米油对照组）、50mg/kg/天（低剂量BDE-3组）、100mg/kg/天（中剂量BDE3组）和200mg/kg/天（高剂量BDE-3组），每组6只。从35日龄开始连续21天灌胃给予BDE-3（0、50、100和200mg/kg/天），记录动物体重变化。于56日龄时，处死动物，收集血清，采用ELISA法测量血清醛固酮（ALDO）和皮质酮（CORT）、促肾上腺皮质激素（ACTH）水平。取肾上腺，称重，快速冰冻一侧肾上腺，取部分组织提取RNA，经RT-qPCR法检测肾上腺细胞Mc2r,Scarb1,Star,Cyp11a1,Cyp21,Hsd3b1,Cyp11b1,Cyp11b2,Hsd11b1,Nr5a1,Igf1,Agtr1,Hsd11b2的mRNA水平；另取部分组织提取蛋白，经Western blot检测肾上腺细胞蛋白SCARB1,StAR,CYP11B1,CYP11B2,CYP21,NR5A1,ACTB以及信号通路蛋白PGC-1?、SIRT1、CREB、pCREB、AMPK、pAMPK的水平；用Bouin液固定另一侧肾上腺，脱水，包埋，石蜡切片，用免疫组织化学法染色CYP11B1（肾上腺束状带细胞特异性生物标记物）和CYP11A1（肾上腺细胞的生物标记物），测定肾上腺细胞其蛋白表达水平。
结果：
体内实验表明，BDE3不影响大鼠体重及肾上腺重量，也不会改变zG和zF区域的百分比。与对照组相比，200mg/kg的BDE3明显增加了血清水平ALDO和CORT水平（P＜0.05），但其不影响血清ACTH水平（P＞0.05）。RT-qPCR结果显示，100mg/kg和200mg/kg的BDE3显著上调Cyp11b1的表达，而以200mg/kg的浓度BDE3增加了Scarb1,Star,Cyp11b2,Cyp21和Nr5a1的表达。BDE3处理后，Mc2r,Cyp11a1,Hsd3b1,Hsd11b1,Hsd11b2,Igf1,和Agtr1转录结果没有改变。Western blot结果显示，BDE-3显著改变了SACRB1,StAR,CYP11B1,CYP11B2,CYP21,和NR5A1蛋白的水平，并使其与各自的mRNA水平平行。使用半定量免疫组织化学染色法测量每个肾上腺细胞的CYP11A1和CYP11B1蛋白水平，显示在100和200mg/kg时增加CYP11B1的密度，而不会影响CYP11A1。同时，Western blot激酶途径结果也显示，在200mg/kg的剂量下，BDE3增加了PGC-1?的水平，而没有影响SIRT1的水平。200mg/kg的BDE3在不影响总AMP活化蛋白激酶（AMPK）水平的情况下降低了磷酸化AMP活化的蛋白激酶（pAMPK）的水平，因此导致200mg/kg的BDE3的pAMPK/AMPK的比例降低。BDE3降低了总CREB的水平，而不影响200mg/kg的BDE3的磷酸化CREB（pCREB）的水平，因此导致高剂量组的pCREB/CREB的比例增加。
结论：
青春期雄性大鼠暴露于BDE3引起肾上腺功能异常。BDE3对肾上腺细胞功能的影响可能通过降低AMPK的磷酸化和增加CREB的磷酸化来刺激肾上腺细胞功能。