苦瓜性别分化相关分子标记的研究

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苦瓜(Momordica charantia.L)是葫芦科苦瓜属的一年生蔓生植物,雌雄同株。苦瓜在全国广泛栽培,是一种重要的蔬菜,而且具有药用价值。目前,分子标记被广泛应用于植物的亲缘关系分析、种质鉴定、遗传图谱构建、目标基因定位、辅助育种等各个方面,但在苦瓜方面的应用较少。本试验采用随机扩增多态性DNA(Random Amplified Polymorphism DNA,RAPD)技术和简单重复间序列标记(inter-simple sequence repeat,ISSR)技术,研究与苦瓜性别连锁的分子标记。研究结果如下:1.用CTAB改良方法可以快速提取苦瓜基因组DNA,其浓度和纯度达到了RAPD和ISSR分子标记试验的要求。2.优化苦瓜RAPD体系,从200条随机引物中筛选出8条可能与性别连锁的RAPD标记。利用全雌、强雌和强雄个体进行验证,发现引物S30所扩增的约550bp的谱带和S66所扩增的约450bp的谱带在所有的全雌性个体都出现,而在所有强雌和强雄个体中都不出现,初步表明这两条是与雌性紧密连锁的RAPD分子标记。3.把RAPD雌性特异条带S30550克隆转化为特异稳定的SCAR标记SR550,说明S30550与苦瓜雌性基因连锁。4.利用ISSR技术进行苦瓜性别的研究,建立苦瓜ISSR-PCR反应体系,得到清晰的ISSR指纹图谱。5.从100条ISSR引物中筛选出7条可能与性别连锁的ISSR标记。利用全雌、强雌和强雄个体进行验证,发现引物807所扩增的约400bp的谱带、809所扩增的约900bp的谱带和810扩增的约1400bp的谱带在所有的全雌性个体都出现,而在所有强雌和强雄个体中都不出现,初步表明这可能是三条与雌性紧密连锁的ISSR分子标记。
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