后牵引兔前颌骨相关骨缝中RANKL及 OPG mRNA表达的实验研究

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[目的]在已建立的上颌骨种植体支抗后牵引兔前颌骨动物模型的基础上,从分子生物学水平,研究在后牵引兔前颌骨作用力下,前颌缝和颧颌缝中RANKL及OPG mRNA的表达情况,进一步探讨颌骨矫形作用的机理,为临床颌骨矫形治疗提供实验参考。[方法]本实验利用课题组前期已建立的上颌骨种植体支抗后牵引兔前颌骨的动物模型,研究分为两部分,第一部分:将不同后牵引力值(50克/侧、100克/侧、150克/侧、200克/侧、250克/侧、300克/侧)施加于兔前颌骨,加力7天后处死实验兔,采用原位杂交技术分别检测前颌缝及颧颌缝中RANKL和OPG mRNA的表达水平,探讨在不同后牵引力值作用下,骨缝中RANKL和OPG mRNA的表达变化情况。第二部分:将相同的后牵引力值(250克/侧)施加于兔前颌骨,作用时间分别为1天、3天、5天、7天、14天、21天,采用原位杂交技术,分别检测前颌缝及颧颌缝中RANKL和OPG mRNA的表达水平,探讨在不同作用时间下,骨缝中RANKL和OPG mRNA的表达变化情况。[结果]RANKL和OPG主要表达于骨缝附近骨细胞、成骨细胞及间质细胞的胞质中,阳性细胞呈椭圆形或梭形,胞浆呈棕黄色,胞核不规则,呈蓝色。第一部分:前颌缝中RANKL及OPG mRNA随着后牵引力值的增加,灰度值均降低,在力值为250克/侧时降到最低,随着力值的继续增加,灰度值开始升高。其中在相同力值作用下,OPG mRNA的灰度值均高于RANKL。RANKL/OPG mRNA灰度值的比值随着力值的增加而下降,并在250克/侧时降到最低,且比值均小于1.0000。结果表明:在压力侧的前颌缝中,随着力值的增加,RANKL及OPG mRNA表达水平均逐渐增强,当力值为250克/侧时达到最强,且RANKL mRNA的表达水平均强于OPG;颧颌缝中RANKL及OPG mRNA灰度值随作用力值的增加而降低,并在力值为250克/侧时降到最低,后随着力值的继续增加,两者灰度值均增大。相同力值下,OPG mRNA的灰度值均低于RANKL, RANKL/OPG mRNA灰度值比值随着力值的增加,其比值平缓地下降,但比值均大于1.0000,表明颧颌缝中RANKL及OPG mRNA表达水平随力值的增加而增强,在250克/侧时达到最强,且OPG阳性表达均强于RANKL。第二部分:在前颌缝中,RANKL及OPG mRNA灰度值随着作用时间延长逐渐减小,在第7天时减到最小,随着时间继续延长,两者的灰度值均开始增大,RANKL/OPG mRNA灰度值的比值随着作用时间的推移而下降,第7天时降到最低,且比值均小于1.0000,此后随着时间的延长,比值上升,并且逐渐接近1.0000。结果表明前颌缝中RANKL及OPG mRNA随着作用时间的延长,表达水平逐渐增强,在作用时间为第7天时,表达水平达到高峰,且OPG mRNA的表达水平均弱于RANKL;在颧颌缝中,随着作用时间的延长,RANKL及OPG mRNA灰度值逐渐降低,RANKL mRNA灰度值在第7天时降达最低,而OPG mRNA滞后于RANKL, OPG mRNA灰度值在作用时间为14天时降到最低。RANKL/OPG mRNA灰度值比值随着时间的推移呈现平缓的上升,在第14天时达到高峰,并且高于1.0000,14天以后,比值逐渐下降。结果表明颧颌缝中RANKL及OPG mRNA随着作用时间的延长,其表达水平均逐渐增强,在作用时间为第7天时,RANKL mRNA表达水平最强,而OPG mRNA在作用时间为第14天时表达最强。[结论]在作用力值为250克/侧时,不论是在受压应力的前颌缝中还是在受张应力颧颌缝中,其破骨效应和成骨效应均最强,骨缝改建处于最活跃的状态:在恒定的后牵引作用力下,在作用时间第7天时,破骨效应达到最强,成骨效应在作用时间为第14天时达到最强,破骨活动与成骨活动是同时进行并处于动态平衡中。受压应力的前颌缝主要表现为以骨吸收为主的改建活动,而受到张应力的颧颌缝主要表现为以骨生成为主的改建活动。
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