ERK1/2-P16(INK4a)信号通路、MDR1与子宫颈腺癌顺铂耐药的分子机制

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目的:  研究P16(INK4a)-ERK1/2信号通路在宫颈腺癌细胞顺铂耐药MDR1(P-gp)形成过程中的机制。  方法:  1、荧光定量PCR检测HeLa及HeLa/DDP细胞中P16(INK4a)mRNA表达的差异。  2、CCK8(CellcountingKit-8)法检测转染P16(INK4a)过表达质粒pEX-2P16(INK4a)后HeLa/DDP细胞的增殖率,Transwell方法检测转染pEX-2P16(INK4a)后HeLa/DDP细胞迁移和侵袭的能力。  3、WesternBlot检测转染pEX-2P16(INK4a)后HeLa/DDP细胞中pERK1/2、ERK1/2及P-gp蛋白水平表达的变化。  结果:  1、qPCR结果显示:HeLa/DDP组中的P16(INK4a)mRNA表达水平较HeLa组明显降低(p<0.05)。  2、CCK8实验:pEX-2P16(INK4a)组增殖率明显低于HeLa/DDP组和pEX-2-空载组(p<0.05),HeLa/DDP组相较于pEX-2-空载组细胞增殖率无明显差异(p>0.05)。  3、Transwell实验:pEX-2P16(INK4a)组相较于HeLa/DDP组及pEX-2-空载组其迁移及侵袭能力明显降低(p<0.05),而HeLa/DDP组与pEX-2-空载组相比其迁移及侵袭能力无明显差异(p>0.05)。  4、WesternBlot结果:转染pEX-2P16(INK4a)后HeLa/DDP细胞中pERK1/2蛋白的表达水平较HeLa/DDP组逐渐升高;P-gp蛋白的表达水平较HeLa/DDP组逐渐降低。  结论:  P16(INK4a)可能是通过ERK1/2信号通路的磷酸化来部分逆转宫颈腺癌顺铂耐药。
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