论文部分内容阅读
乳酸菌作为国际公认的安全生物菌株，其产物因具有多种生物活性常常用于研发功能性产品，乳酸菌胞外多糖已然成为了当今研究的热点之一。而本研究就是以从芬兰传统发酵酸奶viili中分离、鉴定得到的一株副干酪乳杆菌VL8为基础，研究其胞外多糖（VL8-EPS）的结构和免疫调节活性，探究VL8-EPS对机体的免疫增强作用，进而为功能性产品的研发提供基础。主要是利用高碘酸氧化及Smith降解、傅里叶红外光谱、核磁共振图谱、β-消除反应、刚果红实验和碘-碘化钾反应分析VL8-EPS的结构;体外试验测定VL8-EPS对小鼠脾淋巴细胞和巨噬细胞RAW264.7免疫调节活性作用;体内试验测定VL8-EPS对正常小鼠的细胞免疫、体液免疫和巨噬细胞吞噬功能。主要研究结果如下: 1.一级结构分析得知，VL8-EPS相邻单糖基连接方式有1→3、1→6、1→2(1→4)，其糖苷键型比约为6.8∶1.2∶1，其中1→3糖苷键为主要键型;VL8-EPS是不含糖醛酸、具有毗喃环结构的特征多糖;1H NMR、13C NMR共同证实VL8-EPS是由5种单糖组成，其多糖含有α和β两种糖苷键型，是以β型吡喃糖为主的糖环结构;VL8-EPS的糖肽键连接方式为O-链接。刚果红实验和碘-碘化钾反应确定VL8-EPS高级结构，可能是具有螺旋构象、存在较长的侧链和较多的分支结构。 2.12.5～800μg/mL浓度范围内的VL8-EPS能显著地促进小鼠脾淋巴细胞的增殖，而且在协同ConA作用时，其诱导小鼠脾淋巴细胞增殖效果明显高于单独施用VL8-EPS，400μg/mL的VL8-EPS增殖效果较对照提高了49.7％(P＜0.01);与ConA单独刺激组相比，50～800μg/mL的VL8-EPS显著地促进了小鼠脾淋巴细胞IL-2、IFN-γ和IL-6细胞因子的分泌水平(P＜0.01)，其分泌量随着多糖浓度增加而增加，具有量效关系。 3.VL8-EPS分别对巨噬细胞RAW264.7作用12h、24h和48h来探究VL8-EPS对巨噬细胞的活性作用，发现VL8-EPS对巨噬细胞无毒性作用，在一定程度上还促进了巨噬细胞增殖;50，200，400，800μg/mL的VL8-EPS能够提高巨噬细胞RAW264.7吞噬中性红能力，促进巨噬细胞产生NO及iNOS mRNA的表达，促进了巨噬细胞IL-1β、TNF-α、IL-6和IL-10免疫细胞因子的分泌(P＜0.01)，且各种检测指标随着VL8-EPS浓度的增加而增加，具有量效关系，VL8-EPS的作用效果与阳性对照LPS相似。 4.对正常小鼠分别灌胃给予0.5，1.0，2.0g/kg/day的VL8-EPS能够提高小鼠体重、脾指数、胸腺指数、迟发型变态反应、血清中溶血素水平和小鼠血清中与免疫相关的细胞因子的含量(P＜0.05或P＜0.01)。其中低、高剂量组的VL8-EPS吞噬能力分别较对照提高了40.89％和30.11％(P＜0.01);小鼠血清中细胞因子IL-2、IFN-γ、IL-4和IL-6的分泌量随着多糖浓度增加而增加，具有量效关系。 结论: VL8-EPS具有良好的构效关系，能够参与对小鼠脾淋巴细胞、巨噬细胞RAW264.7和正常小鼠机体的免疫调节，能够增强机体免疫力的作用，这为免疫增强剂类产品的研究提供了基础，对于一些疾病的预防、提高机体免疫能力具有重要作用。