研究背景小细胞肺癌约占全部肺癌患者的1 5%-20%,属于高度恶性的神经内分泌性肿瘤,具有进展快、易转移、预后较差等特点。目前临床上对于小细胞肺癌的治疗方法主要是化疗,一线化疗方案为顺铂加依托泊苷。大部分小细胞肺癌患者在化疗初期对化疗非常敏感,但会逐渐产生化疗耐药,这是小细胞肺癌临床治疗的一大难题,因此,阐明小细胞肺癌的化疗耐药机制,将有助于发现新的解决化疗耐药的方法。研究目的我们课题组前期研究发现环状RNA circESRP1可以促进小细胞肺癌化疗耐药,因此我们推测由circESRP1前体mRNA翻译形成的ESRP1蛋白也可能参与小细胞肺癌化疗耐药的调控。我们首先通过qRT-PCR和Western Blot实验发现ESRP1在小细胞肺癌化疗耐药细胞中的表达明显低于化疗敏感细胞,再通过体内和体外实验验证ESRP1在小细胞肺癌化疗耐药中的作用,然后利用生物信息学预测ESRP1剪接调控的下游靶点,将ESRP1与肿瘤化疗耐药的经典信号通路相联系,分析ESRP1在小细胞肺癌化疗耐药调节中的分子机制,为发现小细胞肺癌化疗耐药的新的分子标志物和治疗靶点提供线索。研究方法及内容1.通过qRT-PCR和Western Blot技术分析比较ESRP1在小细胞肺癌化疗耐药细胞（H69AR和H446DDP）和化疗敏感细胞（H69和H446）中的表达差异。2.收集小细胞肺癌肿瘤组织和癌旁组织样本,通过qRT-PCR和Western Blot实验比较ESRP1在小细胞肺癌肿瘤组织和癌旁正常组织中的表达差异,并分析ESRP1与小细胞肺癌患者预后的关系。3.利用CCK8实验、流式凋亡、流式周期实验明确ESRP1在体外对小细胞肺癌化疗耐药的影响。4.裸鼠皮下成瘤实验明确ESRP1在体内对小细胞肺癌化疗耐药的影响。5.利用转录组测序和生物信息学分析ESRP1可调控的选择性剪接事件类型及相关功能,RIP实验进一步确定ESRP1可与CARM1的pre-mRNA结合,rescue实验证明ESRP1可通过对CARM1的选择性剪接参与调节小细胞肺癌化疗耐药。6.生物信息学预测CARM1可对smad7蛋白精氨酸甲基化修饰,利用Co-IP实验验证smad7与CARM1结合,Western Blot实验探究ESRP1/CARM1轴对TGF-β/smad信号通路的影响。研究结果1.ESRP1在小细胞肺癌化疗耐药细胞和肿瘤组织中低表达;ESRP1在小细胞肺癌肿瘤组织中的表达水平与患者的总生存期呈正相关关系。2.过表达ESRP1可抑制小细胞肺癌化疗耐药,并诱导细胞凋亡和G0/G1期细胞阻滞;反之,下调ESRP1可促进小细胞肺癌化疗耐药,并抑制细胞凋亡和G0/G1期细胞阻滞。3.过表达ESRP1后可抑制小细胞肺癌在体内的生长,并促进小细胞肺癌的化疗药物敏感性。4.ESRP1调控CARM1选择性剪接,通过降低CARM1FL转录本的表达,抑制小细胞肺癌化疗耐药。5.CARM1介导smad7蛋白的精氨酸甲基化,激活TGF-β/smad信号通路。结论ESRP1通过调控CARM1的选择性剪接,介导smad7蛋白精氨酸甲基化,抑制TGF-β/smad信号通路,继而抑制小细胞肺癌化疗耐药。