目的:单纯疱疹病毒Ⅱ型（Herpes simplex virus type 2,HSV-2）是疱疹病毒家族的成员之一,它是一种有包膜的双链DNA病毒。HSV-2感染主要引起生殖器疱疹,也是生殖器溃疡（Genital Ulcer Disease,GUD）的常见病因,人体感染后将终身携带该病毒。女性生殖道（Female Reproductive Tract,FRT）粘膜参与人体天然免疫抗病毒反应。人宫颈上皮细胞（human cervical epithelial cells,HCEs）是FRT粘膜天然免疫抗病毒的重要组成部分。研究表明,人宫颈上皮细胞具有识别病毒双链RNA的Toll样受体3（TLR3）,其被激活后可产生受干扰素调控的抗病毒因子。目前尚无有关人宫颈上皮细胞是否具有功能性双链DNA（dsDNA）感受器的研究报道。因此,本研究检测了dsDNA感受器在人宫颈上皮细胞中的表达,以及这些感受器是否能被其配体Poly（dA:dT）激活,诱导细胞产生抗病毒因子。方法:用MTT法和Annexin V/7-AAD细胞凋亡试剂盒检测Poly（dA:dT）对人宫颈上皮细胞（End1/E6E7细胞）的毒性作用。用实时荧光定量PCR技术和Western Blot技术检测Poly（dA:dT）对HSV-2感染和复制的抑制作用。用实时荧光定量PCR技术、ELISA技术及Western Blot技术检测Poly（dA:dT）对End1/E6E7细胞内干扰素（IFN-λ1和IFN-λ2/3）、干扰素刺激基因（ISG15、ISG56、OAS1、OAS2、MxA、MxB、Viperin和GBP5）等抗病毒因子表达的影响,并研究了细胞免疫识别Poly（dA:dT）的相关信号通路。检测Poly（dA:dT）对人宫颈上皮细胞中DNA/RNA sensors（c GAS、STING、DAI、IFI16、AIM2、DHX29和RIG-Ⅰ）表达的影响。利用CRISPR/Cas9技术敲除细胞的RIG-Ⅰ基因,研究Poly（dA:dT）抑制HSV-2复制的机制。结果:实验所用Poly（dA:dT）浓度（0.1～10μg/mL）对End1/E6E7细胞没有细胞毒性作用。Poly（dA:dT）处理细胞能显著地抑制HSV-2基因和蛋白的表达。机制研究显示,Poly（dA:dT）能上调细胞内IFN-λs和多种ISGs抗病毒因子的表达,并能诱导干扰素调节因子（IRFs）和信号传导及转录激活因子（STATs）的蛋白磷酸化。通过检测Poly（dA:dT）对多个DNA/RNA sensors表达的影响以及利用CRISPR/Cas9技术敲除细胞内RIG-Ⅰ基因,我们发现,敲除细胞内RIG-Ⅰ基因导致Poly（dA:dT）对HSV-2复制的抑制作用和对抗病毒因子的诱导能力明显降低。此外,RIG-Ⅰ的敲除还抑制了Poly（dA:dT）对IRF/IFN和JAK/STAT信号通路的激活。结论:Poly（dA:dT）能免疫激活人宫颈上皮细胞内的DNA/RNA感受器,诱导细胞产生IFN-λs和多种抗病毒ISGs,并能有效地抑制HSV-2感染和复制。机制研究显示,RIG-Ⅰ对Poly（dA:dT）激活细胞内IRF/IFN和JAK/STAT信号通路至关重要。RIG-Ⅰ的敲除导致Poly（dA:dT）对细胞的激活反应明显降低,对HSV-2的抑制作用也减弱,说明RIG-Ⅰ在Poly（dA:dT）介导的HSV-2抑制中发挥关键作用。这些研究发现为临床使用DNA/RNA感受器的激活物治疗HSV-2提供了直接实验科学依据。