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猪流行性腹泻(Porcine Epidemic Diarrhea,PED)是由猪流行性腹泻病毒(Epidemic diarrhea virus,PEDV)引起的各个不同日龄阶段的猪均可发病的一类急性、高度接触性肠道传染病。以哺乳仔猪尤其是3-10日龄仔猪的腹泻、呕吐、脱水和高死亡率为主要临床特征。从1971年被发现至今已然发展成为严重影响养猪产业的重大病毒性传染病之一。因此,做好猪流行性腹泻病的防控工作至关重要。通过对吉林农业科技学院疫病检测中心近年来送检病料的研究分析表明,吉林地区引起猪腹泻并致死的病毒性疾病主要包括两种,即流行性腹泻(PED)和传染性胃肠炎(TGE),且两种病多数存在交叉感染。因此,本试验在对PED的研究基础上,建立PEDV和TGEV双重RT-PCR检测方法进行研究分析。首先用胶体金试剂盒和常规RT-PCR方法筛选出PED单纯感染和PED、TGE双重感染的阳性病料;根据GeneBank公布的序列的对比分析,设计PEDV和TGEV的引物。目的基因长度分别为PEDV 223bp,TGEV 832bp。对建立的双重RT-PCR方法进行多次重复试验,最终摸索出反应的最佳条件为Premix Taq DNA酶12.5μL,PEDV上游引物1μL,PEDV下游引物1μL,TGEV上游引物1μL,TGEV下游引物1μL,cDNA模板2.5μL,灭菌双蒸水6μL,总体系为25μL。最佳的扩增程序为:94℃2min;94℃30s,54℃30s,72℃1min,35个循环;72℃10min。试验结果证明,PEDV和TGEV的双重RT-PCR具有良好的特异性。可用作临床快速检测PED和TGE。利用胶体金检测及上述建立的双重RT-PCR检测法对吉林市某猪场的发病猪群进行猪流行性腹泻和猪传染性胃肠炎以及其他引起腹泻的病毒病的检测。其结果显示为猪流行性腹泻病毒(PEDV)的单纯感染,排除其他病毒性腹泻的混合感染。将已确诊为PEDV的病猪采集肠道组织及淋巴结,用常规方法制备成自家组织灭活苗:用0.4%甲醛溶液灭活、双抗处理、无菌检验、安全试验后,将所制备的疫苗应用于本发病猪场的45头健康猪群的免疫,其中包括母猪18头,仔猪18头,后备猪9头。用酶联免疫吸附试验(ELISA)法,在使用组织灭活苗前后监测抗体水平,与对照组即市售的两种常规疫苗的免疫效果进行比较。探索出预防本病的最佳免疫方案,为有效控制流行性腹泻病提供技术支持。试验结果表明,在组织灭活苗使用前后,所测得的抗体水平有明显提升,且相较于其他两种市售疫苗,平均值增长幅度较大,但离散度较高。总体来说效果良好。