脂氧素A4对高氧暴露下肺泡二型上皮细胞的保护作用及机制

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目的:研究脂氧素A4对高氧暴露下肺泡二型上皮细胞的保护作用,探讨LXA4在高氧肺损伤中的作用及机制。  方法:AECII细胞原代培养,并随机分为Ⅰ:.空气组(对照组)、Ⅱ:.高氧组、Ⅲ:.空气+LXA4组、Ⅳ:.高氧+LXA4组。Ⅰ和Ⅲ组暴露于空气中,Ⅱ和Ⅳ组暴露于95%的氧气中,Ⅰ和Ⅱ组不加药,Ⅲ和Ⅳ组给予LXA4干预。于暴露12h后在倒置相差显微镜下观察细胞生长状态及形态学变化;2,7-二氯二氢荧光素二乙酯(DCFH-DA)染色后荧光显微镜检测细胞内ROS水平;并通过实时荧光定量PCR测定细胞内Nrf2、HO-1和NQO1mRNA的表达量;免疫荧光染色检测Nrf2的核转移情况。  结果:(1)空气组和空气+LXA4组细胞呈立方形或圆形岛状生长,贴壁好,细胞与细胞之间紧密连接,胞质内可见较多颗粒(板层小体),几乎无悬浮细胞.;高氧组暴露12h后,与空气组、空气+LXA4组比较细胞体积减小,细胞间隙明显增大,胞内颗粒数目减少,贴壁欠佳,可见大量悬浮死细胞;高氧+LXA4组与高氧组比较,细胞排列较紧密,贴壁较好,悬浮细胞较少,与空气组、空气+LXA4组比较,细胞外形变化不大,细胞间隙稍增宽,可见少量悬浮细胞。  (2)免疫荧光结果显示,空气组和空气+LXA4组ROS荧光强度很弱,几乎不可见;高氧组暴露12h后,与空气组、空气+LXA4组比较,细胞内ROS荧光强度明显增加;高氧+LXA4组暴露12h后,与高氧组比较,ROS荧光强度明显降低,但与空气组、空气+LXA4组比较,ROS荧光强度仍有一定程度的增加。  (3)免疫荧光结果显示,空气组和空气+LXA4组Nrf2主要集中在细胞质内,无明显核转移;高氧组暴露12h后,与空气组、空气+LXA4组比较,Nrf2出现核转移,在细胞质、细胞核内均可见表达;高氧+LXA4组暴露12h后,与高氧组比较,Nrf2核转移更明显,与空气组、空气+LXA4组比较,Nrf2出现明显核转移,细胞质、细胞核内均可见高表达。  (4)高氧暴露12h后各组AECII细胞Nrf2mRNA相对于空气组的表达量分别为:空气+LXA4组:1.011±0.052;高氧组:1.614±0.130;高氧+LXA4组:2.013±0.258。空气+LXA4组表达量与空气组无明显区别,差异无统计学意义(P>0.05);高氧组表达量较空气组、空气+LXA4组增加,差异有显著统计学意义(P<0.01);高氧+LXA4组表达量较高氧组、空气组和空气+LXA4组均明显增加,差异有显著统计学意义(P<0.01)。  (5)高氧暴露12h后各组AECII细胞HO-1mRNA相对于空气组的表达量分别为:空气+LXA4组:1.067±0.081;高氧组:1.509±0.118;高氧+LXA4组:1.951±0.241。空气+LXA4组表达量与空气组无明显区别,差异无统计学意义(P>0.05);高氧组表达量较空气组、空气+LXA4组增加,差异有显著统计学意义(P<0.01);高氧+LXA4组表达量较高氧组、空气组和空气+LXA4组均明显增加,差异有显著统计学意义(P<0.01)。  (6)高氧暴露12h后各组AECII细胞NQO1mRNA相对于空气组的表达量分别为:空气+LXA4组:1.027±0.101;高氧组:1.519±0.153;高氧+LXA4组:1.944±0.244。空气+LXA4组表达量与空气组无明显区别,差异无统计学意义(P>0.05);高氧组表达量较空气组、空气+LXA4组增加,差异有显著统计学意义(P<0.01);高氧+LXA4组表达量较高氧组、空气组和空气+LXA4组均明显增加,差异有显著统计学意义(P<0.01)。  结论:LXA4可上调高氧暴露下AECII细胞内Nrf2及其相关抗氧化酶HO-1和NQO1mRNA的表达,同时可增加Nrf2核转移、减少细胞内ROS的生成。但对暴露于空气中的AECII细胞则无明显影响,提示LXA4对高氧暴露下肺泡二型上皮细胞的损伤有一定的保护作用。
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