糖尿病(Diabetes Mellitus,DM)是一种常见的慢性疾病。目前2型糖尿病患者已占到90%以上,其发病机制主要是胰岛素抵抗和胰岛β细胞损伤,二者相互影响,相互促进,从而导致血糖、血脂代谢紊乱。本课题所研究的两味药材石榴籽油、紫苏籽油,均为高度不饱和的天然油脂。石榴酸是石榴籽油重要的生理活性成分,α-亚麻酸是苏子油重要的生理活性成分,这两种成分在油中的含量均很高(达60%-80%)。石榴酸是ω-3型高度不饱和脂肪酸,与生理功能很强的α-亚麻酸一样是补充人体缺乏ω-3系列不饱和脂肪酸最理想的成分。近年来研究发现,富含多不饱和脂肪酸的植物油具有非常有益的生理功能,包括抗癌、降血压、抗致癌、减肥等,尤其在糖尿病、高脂血症方面的应用已引起越来越多科研人员的关注。国内对其在药效方面的研究多缺乏系统,为了更好的利用石榴籽和紫苏籽资源以及开发降血糖、血脂功能性药品,本研究旨在通过建立可模拟人体2型糖尿病的小鼠动物模型,比较石榴籽油、紫苏籽油以及联合用药对2型糖尿病小鼠血糖、血脂的影响,并初步探讨其降糖、降脂机制。本文在综述了石榴籽油、紫苏籽油脂肪酸成分及药理作用的基础上,主要进行了超临界CO2流体萃取石榴籽、紫苏籽以及复方混合物的工艺参数考察与优化;以石榴酸、α-亚麻酸为对照品,采用柱前衍生化-HPLC法对所萃取油料进行含量测定;观察石榴籽油、紫苏籽油以及其复方混合油对2型糖尿病小鼠的降糖、降脂作用。1.工艺研究采用超临界C02流体萃取法从原料药石榴籽、紫苏籽以及两者质量比1:1混合物中提取油料。通过单因素试验,以得油率X(%)和油脂清亮度为考察指标,确定了石榴籽油、紫苏籽油及其复方混合油的最佳超临界C02萃取工艺条件。从石榴籽中提取得到石榴籽油,其最佳超临界萃取条件为:萃取压力为29-30Mpa,萃取温度为45℃,萃取时间为1h;分离釜Ⅰ的分离压力为12Mpa,分离温度为50℃;分离釜Ⅱ的分离压力为5Mpa,分离釜Ⅱ的分离温度为35℃。从紫苏籽中提取得到紫苏籽油,其最佳超临界萃取条件为:萃取压力为29-30Mpa,萃取温度为40℃,萃取时间为3h;分离釜Ⅰ的分离压力为12Mpa,分离温度为50℃;分离釜Ⅱ的分离压力为5Mpa,分离温度为35℃;将石榴籽粗粉后,与紫苏籽按重量比(w/w=1:1)混合均匀,粉碎成40目细粉,提取得到复方共提油,其最佳超临界萃取条件为:萃取压力为29-30Mpa,萃取温度为40℃,萃取时间为2h;分离釜Ⅰ的分离压力为1OMpa,分离温度为50℃;分离釜Ⅱ的分离压力为5Mpa,分离釜Ⅱ的分离温度为35℃。2.质量标准研究以石榴酸、α-亚麻酸为对照品,采用柱前衍生化-HPLC法,分别测定了石榴籽油、紫苏籽油、及其复方混合油中石榴酸、α-亚麻酸的含量。3.药效研究本部分研究主要是通过建立了两种不同的实验性2型糖尿病小鼠模型,初步观察了石榴籽油、紫苏籽油及其自调混合油(石榴籽油:紫苏籽油=1:1)、复方共提油的降糖、降脂作用,探讨了其可能的作用机理。同时评价了混合油的降糖、降脂作用是否优于单味药,以期为石榴籽油和紫苏籽油组方调节2型糖尿病糖脂代谢紊乱提供一定参考。3.1复方石榴籽油对高脂饮食+STZ所致2型糖尿病小鼠的实验研究本实验采用先高脂饲料喂养,再联合小剂量链脲佐菌(STZ)素诱导高血糖高血脂模型。实验分为7组,分别为正常组、模型组、二甲双胍组、石榴籽油组、紫苏籽油组、自调混合油高剂量组、自调混合油低剂量组,给药9周。比较了石榴籽油、紫苏籽油以及自调混合油对2型糖尿病小鼠空腹血糖、TC、TG、LDL-C、尿酸、总胆红素的影响,并探讨了其对肝脏载脂蛋白B100、FAS酶含量的作用。结果表明石榴籽油具有降血糖作用,紫苏籽油降TG作用优于石榴籽油,混合油表现出较好的降血脂作用,但未对血糖产生影响。与正常组相比,模型组小鼠肝脏Apo-B100、FAS酶含量显著升高,且具有统计学差异,表明糖尿病与这两种酶的升高有关。与模型组相比,石榴籽油组小鼠肝脏Apo-B100含量显著降低,表明石榴籽油可以抑制Apo-B100的分泌,但对FAS酶的含量未有显著降低。与模型组相比,紫苏籽油组小鼠肝脏FAS含量显著性降低,表明紫苏籽油可以抑制FAS的合成与分泌,但对Apo-B100含量影响不大。与模型组相比,混合油高、低剂量组对小鼠肝脏Apo-B100、FAS酶含量均有显著降低,且高剂量效果更明显。以上表明石榴籽油、紫苏籽油可能对2型糖尿病预防作用机理不同。3.2复方石榴籽油对STZ+高脂饮食所致2型糖尿病小鼠的实验研究本实验采用先链脲佐菌素(STZ)腹腔注射,再连续高脂饲料喂养诱导实验性2型糖尿病小鼠模型。实验分为6组,分别为正常组、模型组、二甲双胍组、血脂康组、复方共提油低剂量组、复方共提油高剂量组,给药25周。分别比较了给药8周、16周、24周末石榴籽油、紫苏籽油、以及复方共提油对2型糖尿病小鼠空腹血糖、TC、TG、LDL-C、HDL-C的影响,观察了其对尿酸、总胆红素、胰岛素(INS)、Apo-B100、FAS的作用。结果表明,石榴籽油具有降血糖作用,紫苏籽油降血脂作用优于石榴籽油。随着给药周期的延长,混合油较单味药降血糖血脂的作用更加明显。与模型组相比,石榴籽油组小鼠肝脏Apo-B100含量显著降低,紫苏籽油组小鼠肝脏FAS含量显著性降低,表明石榴籽油可以抑制载脂蛋白B100的分泌,而紫苏籽油可以抑制脂肪酸合成酶FAS的分泌。且与前期药效具有重复性,混合油对Apo-B100、FAS的作用更加显著。另口服葡萄糖耐量试验(OGTT)的结果显示,正常组小鼠的血糖在空腹血糖0 min以及口服葡萄糖后20、60、120 min时均低于高脂模型组,且在各时间点均有显著性差异。复方共提油高剂量组小鼠血糖在60、120 min时均低于模型组,且具有统计学差异。提示石榴籽油紫苏籽油混合后能够改善2型糖尿病小鼠的葡萄糖耐量。