【摘 要】
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根据酵母基因的密码子选择偏向及总G+C含量,同时综合在真核系统中影响基因转录、翻译及mRNA稳定性等因素,对来源于瘤胃微生物反刍月形单胞菌（Selenomonas ruminantium）的高比活
【出 处】
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中国农业科学研究院研究生院饲料研究所 中国农业科学院饲料研究所
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根据酵母基因的密码子选择偏向及总G+C含量,同时综合在真核系统中影响基因转录、翻译及mRNA稳定性等因素,对来源于瘤胃微生物反刍月形单胞菌（Selenomonas ruminantium）的高比活植酸酶基因phyS-O在不改变其编码氨基酸序列的基础上进行了优化改造,设计合成了适合于在毕赤酵母中高效表达的基因phyS-M.将合成的基因克隆到酵母表达载体pPIC9上,与酵母α-因子信号肽编码序列以正确的阅读框架融合构成表达重组子pPIC9-phyS-M,phyS-M受酒巴精氧化酶基因启动子驱动.表达重组子转化Pichia pastoris GS115,构建出高产植酸酶工程菌株.实验证实,重组毕赤酵母中植酸酶基因phyS-M得到了高效表达,表达产物能有效分泌且具有正常的生物学活性.在5L发酵罐中,优化改造后的植酸酶基因在重组酵母中的表达量可达到4mg/ml,活力为1.6×10<6>U/mL,比未经改造基因的表达量提高了10倍.重组酵母表达的植酸酶比活达4.0×10<5>U/mg,SDS-PAGE证实其分子量约为38kD.
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