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虽然植物细胞核转基因技术已在世界不同地区得到了应用,并为现代农业带来了革命性改变,但其难以避免的转基因沉默现象和生物安全问题引发了科学界及社会大众的广泛担忧,并给基因工程在农业中的广泛使用带来限制。而叶绿体转化技术因独特的细胞质遗传优势成为植物转基因工程的热点之一。叶绿体转化法具有生物安全性高、外源基因遗传稳定、高效表达及共转化等优点,其在生物安全性上的独特优点受到广泛关注,为解决转基因作物的基因逃逸问题提供了很好的解决方案,真正生物安全的转基因作物有望通过该技术获得。 黄瓜(Cucumis sativus L)属葫芦科植物,本文中选用“津研4号”黄瓜品种作为实验材料。首先,构建黄瓜特异性叶绿体表达载体pDK53-il6、 pDK53-strail、pDK53-il6-pC3和pDK53-strail-pC3,分离黄瓜叶绿体并用构建的载体进行离体电转化,通过分子生物学手段鉴定质粒的表达情况。进一步尝试了原生质体分离与培养及电转化,为最终期待获得转基因黄瓜植株,探索将黄瓜叶绿体作为新的高效生物反应器的应用,用于生物疫苗及药用蛋白的生产,拓宽现代农业的应用范围奠定了重要基础。 此外,基于本实验室研究的疏水蛋白HGFI的两性特点,利用核酸与蛋白质结合的琼脂糖凝胶阻止实验,对HGFI与黄瓜叶绿体特异性表达载体间的作用进行分析,并构建了叶绿体导肽(TP)与疏水蛋白HGFI的融合表达载体,希望后续能通过叶绿体导肽的定位及疏水蛋白的包埋特性,探索出一条叶绿体转化的新方法,以解决叶绿体转化效率的技术难题。