背景:尿道下裂是儿童泌尿生殖系统最常见的畸形之一,其国内外的流行病学调查发病率为1:300¹:200,并有逐年上升趋势。尿道下裂的主要临床表现为尿道开口的异常伴阴茎下弯畸形,阴茎背侧的包皮堆积,对儿童的心理健康,成年后的生育能力有很大影响。目前对于大部分的尿道下裂病因不明,认为与遗传和性激素异常调控影响了尿道发育有关,最终导致了尿道下裂。尿道的雄性化发育过程依赖于雄激素的作用,而雄激素或雄激素受体的异常将导致男性泌尿生殖器发育障碍,对于雄激素受体相关信号通路的研究仍是热点。肌腱膜纤维肉瘤基因B型（v-mafmusculoaponeurotic fibrosarcoma oncogene family protein B,Mafb）是Maf家族重要的成员,是一种碱性亮氨酸拉链DNA结合蛋白,是真核生物中保守性较高的一类核转录因子。研究发现它不仅与雄性泌尿生殖器发育相关,也在细胞的增殖、分化、器官的发生密有着重要作用,然而其作用机制研究仍不清楚。本研究拟通过原代培养的包皮成纤维细胞株,利用雄激素受体干预剂（双氢睾酮,DHT;氟他胺,Flu）,研究其对Mafb表达情况的影响,同时探讨在雄性泌尿生殖器发育过程中Mafb及其相关安百的调控机制,为尿道发育畸形的研究奠定基础。目的:本实验主要探讨在体外包皮成纤维细胞株中,DHT与Flu对Mafb基因表达的影响,筛选Mafb相关蛋白,为尿道发育畸形的研究奠定基础。方法:利用原代培养的正常儿童包皮成纤维细胞株,分别采取不同浓度DHT与Flu进行干预,通过RT-PCR、免疫荧光和Western Blot检测Mafb的转录表达情况。通过免疫共沉淀联合质谱（MALDL-TOF/TOF-MS）分析与Mafb相互作用蛋白。结果:成功建立原代包皮成纤维细胞株,在DHT浓度为3.0×10^-8mol/L与3.0×10^-6mol/L干预条件下,Mafb mRNA的表达量分别为0.372±0.003,0.594±0.045,与正常组（0.444±0.007）相比,DHT 3.0×10^-6mol/L组有显著上调（P=0.005）,而DHT 3.0×10^-8mol/L组上调差异不明显（P=0.145）;Flu 15μmol/L干预条件下,Mafb mRNA的表达量为0.221±0.013,与正常组相比,表达量显著下降（P=0.0004）。细胞免疫荧光分析表明,与正常对照组相比（0.027±0.006）,DHT 3.0×10^-8mol/L组（0.046±0.004）、3.0×10^-6mol/L（0.076±0.003）组Mafb表达量明显上调（F=0.01,P=0.000）,而Flu组（0.006±0.002）显著下调（P=0.009）。同样Western Blot结果显示,较对照组蛋白水平（0.163±0.001）相比,DHT 3.0×10^-8mol/L组（0.146±0.001）上调无差异（P=0.96）,DHT 3.0×10^-6mol/L（0.598±0.087）组Mafb表达量上调差异显著（P=0.0001）,而Flu组（0.066±0.002）明显下调（P=0.04）。免疫共沉淀联合质谱分析结果发现13种与Mafb相互作用的蛋白,分别是FOS、JUN、MAPK8、ATF3、EGR2、HOXB3、KDM6A、NCOA6、CTCF、HOXB1、HOXA3、PKNOX1、RBBP5,根据蛋白质评分和匹配序列结果,筛选出FOS蛋白可能与MafB最为相关。免疫荧光双标结果证实FOS与MafB表达部位高度一致,提示二者具有密切相互作用,与蛋白质网络分析一致。结论:在体外培养包皮成纤维细胞株中,Mafb基因的表达受DHT和Flu的调控。Mafb作为雄激素受体下游调控蛋白,在雄激素发挥生理作用机制中起关键作用。FOS可能是Mafb发挥功能的重要协同作用蛋白。