铁皮石斛原球茎多次继代培养后，分化能力减弱，运用正交实验方法研究在6-BA，IBA，pH三个因素三水平下的L9(34)实验。得出铁皮石斛原球茎在N6的培养基上最佳分化配方为6BA的浓度为2mg/L，IBA浓度为0.2mg/L，pH值为5.8。 尝试用K+代替部分添加物，运用L9(34)正交实验，研究不同培养基种类，琼脂的含量，以及KCl浓度对于铁皮石斛丛生苗生根的影响。结果证明，铁皮石斛丛生苗在N6的培养基，KCl为2.5mol/L，琼脂的含量为4g/L，最有利于根的生长。 相关序列扩增多态性(sequence-related amplified polymorphism，SRAP)是一种新型的基于PCR的标记系统，由美国加州大学蔬菜作物系Li与Quiros博士于2001年提出。具有简便，稳定，中等产率和容易得到选择条带序列的特点。 针对铁皮石斛SRAP反应的特点，参考有关文献，设计了引物，对铁皮石斛SRAP反应体系中各个主要影响因子进行了优化和筛选，建立了标记位点清晰、稳定性强，重复性好的，可用于铁皮石斛SRAP-PCR分析的最适反应体系。 从设计的81对引物中，筛选多态性最好的两对引物对铁皮石斛的12个野生居群进行SRAP扩增。共获得91个DNA片段，其中多态性片段79个，占总带数的86.81％，并运用POPGENE1.31和AMOVAversion1.55软件分析了铁皮石斛12个野生居群的SRAP分子指纹数据。结论为铁皮石斛种群间的基因分化系数Gsl.为0.3348，居群间水平的的Shannon信息指数I为0.4038，居群内的I值为0.1584，遗传多样性的64.68％分布于居群内(φst=0.2430)，各居群间的差异显著都说明铁皮石斛基因多样性主要存在于居群内。对样品进行UPGMA聚类分析12个居群分成两大类，浙江的居群的单独成一支。 因此，SRAP技术可有效地应用于铁皮石斛的遗传多样性及亲缘关系的研究。SRAP分子标记