背景和目的:半乳糖激酶是一种磷酸转移酶,以一分子腺嘌呤核苷三磷酸（ATP）为磷酸基团供体催化α-D-半乳糖磷酸化生成半乳糖1-磷酸和腺嘌呤核苷二磷酸（ADP）。半乳糖激酶在体内的功能是参于β-D-半乳糖向1-磷酸葡萄糖的分解代谢。半乳糖激酶首先从哺乳动物肝脏中分离出来,并且广泛存在于酵母,古细菌和植物中。实验方法:以Thermus thermophilus JCM10941基因组为模板,通过PCR完成对tth0825基因的扩增,以pET28a为载体,构建重组质粒pET28a-tth0825,采用E.coli Transetta（DE3）作为宿主菌表达重组蛋白,经过镍柱亲和层析获得纯化蛋白,纯化后的蛋白再进行催化性质分析。结果:通过PCR方法成功获得了基因序列,并成功构建了重组质粒pET28a-tth0825,表达菌Transetta-28a-tth0825成功表达了大小约39.5kDa的蛋白。经过性质表征,半乳糖激酶Tth0825的最适温度为70℃,最适pH值为9.5,最佳金属离子为Mg²⁺,半乳糖激酶Tth0825催化D-半乳糖反应转化率为60%左右。结论:本实验成功构建了重组质粒pET28a-tth0825,并在大肠杆菌表达体系中成功表达,经过镍柱亲和层析纯化后得到纯蛋白,半乳糖激酶表现出良好的热稳定性和催化活性。