【摘 要】
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目的:应用磁珠分选法(MACS)分离人食管肿瘤细胞(ECCs)中p75NTR阳性细胞,并研究其生物学特性。方法:从人原发食管癌组织中培养出可连续传代的肿瘤细胞系;应用FACS检测ECCs中p7
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目的:应用磁珠分选法(MACS)分离人食管肿瘤细胞(ECCs)中p75NTR阳性细胞,并研究其生物学特性。方法:从人原发食管癌组织中培养出可连续传代的肿瘤细胞系;应用FACS检测ECCs中p75NTR阳性细胞,并应用MACS分离ECCs中p75NTR阳性细胞;观察p75NTR阳性细胞生长特点、软琼脂克隆形成能力、在无血清培养基(SFM)中形成细胞球的能力,及其在裸鼠体内成瘤能力;检测在SFM中ECCs所形成细胞球中p75NTR阳性细胞的比例及生长特点;检测ECCs在化疗药物作用不同时间检测其中p75NTR阳性细胞比例的变化,及p75NTR阳性细胞与阴性细胞在不同浓度化疗药物作用48小时后存活比例的比较。结果:应用II型胶原酶消化法从人原发食管肿瘤组织中培养出6个可连续传代的EC细胞系;应用FCM检测ECCs中p75NTR阳性细胞为0~3.35%,MACS分选出ECCs中p75NTR阳性细胞,回收率为20%,纯度为90%以上;p75NTR阳性细胞在软琼脂中具有较强的克隆形成能力,并能在SFM中悬浮生长、形成细胞球,具有较强的致瘤能力,只需2×103个细胞即可在裸鼠体内形成新的肿瘤;ECCs在SFM中可悬浮生长并形成细胞球,在所形成的细胞球中p75NTR阳性细胞的比例升高;ECCs在经化疗药物作用后p75NTR阳性细胞的比例明显增高(P<0.01),在不同浓度化疗药物作用48h后p75NTR阳性细胞存活比例较阴性细胞相比明显增高(P<0.05)。结论:应用MACS从ECCs中分离出的p75NTR阳性细胞具有自我更新、分化、增殖能力,具有较强的克隆形成及在裸鼠体内的致瘤能力,对化疗药物具有一定的耐药性,具有肿瘤干细胞的特性。
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