γH2AX在指导肺癌患者个体化治疗中的作用研究

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目的:通过分别检测肺癌患者肿瘤细胞及外周血淋巴细胞中磷酸化组蛋白(γH2AX)表达的情况,反映该患者癌细胞及外周血淋巴细胞对放化疗敏感性的意义,探寻用肿瘤细胞甚至外周血标本预测肿瘤患者对放化疗敏感性经济、简便、快速的方法,以指导肿瘤患者的个体化治疗。方法:1.细胞培养将肺癌患者肿瘤组织制备成单细胞悬液,进行原代细胞培养;采用免疫细胞化学方法检测验证细胞;抽取同一患者的外周血,分离淋巴细胞,用含PHA(植物血凝素)的1640培养液培养,使其大量增殖。2.细胞处理2.1药物作用用不同质量浓度顺铂、卡铂、吉西他滨、阿霉素同时处理肿瘤细胞及淋巴细胞,分别检测磷酸化组蛋白γH2AX的表达及细胞活性。2.2 X线照射以不同剂量X线照射癌细胞及淋巴细胞,分别检测磷酸化组蛋白γH2AX的表达及细胞活性。3.γH2AX的检测采用免疫细胞化学方法,标记肿瘤细胞及淋巴细胞内磷酸化组蛋白γH2AX的灶点数;流式细胞术检测肿瘤细胞及淋巴细胞内阳性表达γH2AX的细胞分数;同时采用MTT(噻唑蓝)比色法,检测经相同药物处理后肿瘤细胞及淋巴细胞的增殖抑制率,计算细胞死亡率。结果:1.肿瘤细胞经不同质量浓度药物处理后,对同一药物而言,γH2AX的表达呈药物依赖性,随着药物浓度的增高而增高;γH2AX的表达水平与肿瘤细胞的死亡率具有相关性,γH2AX的表达越高,肿瘤细胞的死亡率越高;每种药物之间γH2AX表达的差异有统计学意义,与肿瘤细胞死亡率之间的差异具有一致性。2.肿瘤细胞经X线照射后,γH2AX表达的灶点数及阳性表达γH2AX的细胞数均呈剂量依赖性,随着照射剂量的增高而增高;同时肿瘤细胞死亡率也呈照射剂量依赖性,照射剂量越大,死亡率越高;而γH2AX的表达水平与肿瘤细胞的死亡率呈正相关,γH2AX的表达越高,肿瘤细胞的死亡率越高。3.患者淋巴细胞经不同剂量X线照射后,γH2AX表达的差异无统计学意义,淋巴细胞死亡率之间的差异亦无统计学意义;淋巴细胞经不同质量浓度的化疗药物处理后,γH2AX表达的差异无统计学意义,淋巴细胞死亡率之间的差异亦无统计学意义。结论:γH2AX表达水平的差异与肺癌患者癌细胞的死亡率之间的差异具有一致性,说明γH2AX可在一定程度上反映肿瘤细胞对于放疗及某些化疗药物的敏感性,提示γH2AX有望成为检测肿瘤患者对放化疗敏感性的指标,对指导肿瘤患者的个体化治疗有重要意义;但淋巴细胞中γH2AX的表达与细胞死亡率不相关,不能反映该肺癌患者对放化疗的敏感性,采用外周血标本预测肿瘤患者的放化疗敏感性有待进一步的研究。
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