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目的 观察鼠李糖乳杆菌（Lactobacillus rhamnosus GG,LGG）、乳双歧杆菌（Bifidobacterium lactis,Bifi）及鼠李糖乳杆菌-乳双歧杆菌二菌复合（Mix）对酒精诱导小鼠肝损伤的影响,评价其对酒精性肝损伤小鼠保护作用的有效性,为进一步了解其在体内的作用机制提供依据。方法 80只6周龄雄性C57BL/6J小鼠随机分为对照组（Ctrl）,鼠李糖乳杆菌组（LGG）、乳双歧杆菌组（Bifi）,鼠李糖乳杆菌-乳双歧杆菌二菌复合组（Mix）,酒精组（EtOH）、酒精+鼠李糖乳杆菌组（EtOH+LGG）、酒精+乳双歧杆菌组（EtOH+Bifi）、酒精+鼠李糖乳杆菌-乳双歧杆菌二菌复合组（EtOH+Mix）,每组10只。Ctrl组、LGG组、Bifi组和Mix组喂养Lieber-De Carli对照液体饲料,EtOH组、EtOH+LGG组、EtOH+Bifi和EtOH+Mix组喂养含5%（w/v）酒精的Lieber-De Carli酒精液体饲料,同时分别予以相应益生菌溶液灌胃。末次灌胃9 h后处死小鼠,取血清检测丙氨酸氨基转移酶（Alanine aminotransferase,ALT）、天门冬氨酸氨基转移酶（Aspartate aminotransferase,AST）水平;肝脏分别进行H＆E染色和油红O染色,观察组织病理学变化;采用试剂盒检测肝脏乙醇脱氢酶（Alcohol dehydrogenase,ADH）、乙醛脱氢酶（Acetaldehyde dehydrogenase,ALDH）活力及丙二醛（Malonaldehyde,MDA）含量;实时荧光定量PCR实验检测炎症因子、氧化应激及胆汁酸（bile acid,BA）信号通路相关基因表达;蛋白免疫印迹检测BA信号通路相关蛋白表达;收集小鼠粪便,采用16S rDNA测序分析小鼠肠道菌群变化。结果 （1）益生菌对酒精诱导小鼠肝损伤的影响:EtOH组小鼠肝脏指数、血清ALT和AST水平较之Ctrl组均明显升高,EtOH+LGG组、EtOH+Bifi和EtOH+Mix组肝脏指数、血清ALT和AST水平较之EtOH组明显降低,且三组效果相似;肝脏H＆E染色结果发现,EtOH+LGG组、EtOH+Bifi和EtOH+Mix组均减少肝细胞炎性细胞浸润和脂肪空泡数量,恢复肝脏正常细胞结构,且肝组织病理评分显著降低;油红O染色结果发现,EtOH+LGG组、EtOH+Bifi和EtOH+Mix组明显减少肝细胞内红染面积且阳性面积率明显降低。（2）益生菌对小鼠肝脏炎性因子基因表达的影响:EtOH组Tnf-α、Il-6、Il-1β、Tgf-β、Mcp1和Il-10 mRNA水平较之Ctrl组均明显升高,EtOH+LGG组、EtOH+Bifi和EtOH+Mix组Tnf-α、Il-6、Il-1β、Tgf-β、Mcp1 mRNA水平较之EtOH组明显降低,效果以EtOH+Mix组最为突出,EtOH+Bifi组次之;EtOH+LGG组、EtOH+Bifi组和EtOH+Mix组较之EtOH组进一步提高了Il-10 mRNA的表达,效果以EtOH+LGG组更为突出。（3）益生菌对小鼠肝脏ADH、ALDH活力得到影响:EtOH组小鼠肝脏ADH活力较之Ctrl显著降低且差异具有统计学意义,ALDH活力无显著差异;EtOH+LGG组、EtOH+Bifi组和EtOH+Mix组ADH和ALDH活力均明显升高,ADH活力升高在EtOH+LGG组和EtOH+Mix组效果更好,而ALDH活力升高在EtOH+LGG组、EtOH+Bifi组和EtOH+Mix组效果相似。（4）益生菌对酒精诱导小鼠氧化应激的影响:EtOH组小鼠肝脏MDA含量较之Ctrl组明显升高,EtOH+LGG组、EtOH+Bifi组和EtOH+Mix组MDA含量较之EtOH组均显著降低且具有统计学差异,效果以EtOH+LGG组最好;EtOH组小鼠肝脏氧化酶基因Nox4、P47 phox、P67 phox和Gp91 phox mRNA水平较之Ctrl组显著升高,EtOH+LGG组、EtOH+Bifi组和EtOH+Mix组小鼠肝脏氧化酶基因Nox4、P47 phox、P67 phox和Gp91 phox mRNA水平较之EtOH组显著降低,且Nox4mRNA水平的降低以EtOH+Mix组更为突出,P47 phox、P67 phox和Gp91 phox mRNA水平的降低均以EtOH+Bifi组最突出;EtOH组Sod1、Catalase和Gsh-px mRNA水平较之Ctrl组均升高且具有统计学差异,EtOH+LGG组和EtOH+Bifi组小鼠肝脏Sod1和Gsh-px mRNA水平较之EtOH组进一步升高且差异具有统计学意义,EtOH+Bifi组Catalase mRNA水平较之EtOH组升高且具有统计学差异,而EtOH+Mix组Sod1、Catalase和Gsh-px mRNA水平较之EtOH组均显著降低且具有统计学差异;EtOH组小鼠肝脏Cyp2e1、Ho-1 mRNA水平较之Ctrl组显著升高且具有统计学差异,Nrf2 mRNA水平无显著差异,EtOH+LGG组、EtOH+Bifi组和EtOH+Mix组小鼠肝脏Cyp2e1 mRNA水平较之EtOH组显著降低,仅EtOH+LGG组和EtOH+Bifi组小鼠肝脏Nrf2和Ho-1 mRNA水平进一步升高且具有统计学差异,EtOH+Mix组小鼠肝脏Ho-1 mRNA水平较之EtOH组降低且具有统计学差异。（5）益生菌对小鼠BA信号通路的影响:EtOH组小鼠肝脏Fxr、Fgfr4、Shp、Bsep、Ntcp mRNA水平较之Ctrl组显著升高,Cyp7a1 mRNA水平显著降低且具有统计学差异,EtOH+LGG组、EtOH+Bifi组及EtOH+Mix组小鼠肝脏Fxr、Fgfr4、Shp、Bsep、Ntcp mRNA水平较之EtOH组降低且差异具有统计学意义,效果以EtOH+Mix组最为突出,而Cyp7a1 mRNA水平有升高趋势,但无统计学差异;EtOH组小鼠相较于Ctrl组肝脏FXR蛋白表达升高、CYP7A1蛋白表达降低且具有统计学差异,EtOH+LGG组、EtOH+Bifi组及EtOH+Mix组小鼠相较于EtOH组肝脏FXR蛋白表达降低,CYP7A1蛋白表达升高且具有统计学差异;EtOH组小鼠回肠脏Fxr、Fgf15 mRNA水平较之Ctrl组升高,仅有Fxr mRNA的升高具有统计学差异,EtOH+LGG组、EtOH+Bifi组及EtOH+Mix组小鼠回肠Fxr、Fgf15 mRNA水平较之EtOH组降低且差异具有统计学意义,Fxr m RN水平的降低以EtOH+LGG组最为显著;EtOH组小鼠回肠FXR、FGF15蛋白表达较之Ctrl组显著升高,EtOH+LGG组、EtOH+Bifi组及EtOH+Mix组小鼠回肠FXR、FGF15蛋白水平较之EtOH组降低且差异具有统计学意义。（6）益生菌对小鼠肠道菌群的影响:16S rDNA基因测序发现chao、ace、sobs、shannon和simpson指数两两比较差异均无统计学意义,说明益生菌不影响小鼠肠道菌群Alpha多样性;通过主坐标分析、主成分分析及偏最小二乘判别分析可知,益生菌能在一定程度上影响小鼠肠道菌群的Beta多样性;门水平上,EtOH组相较于Ctrl组Actinobacteria和Firmicutes显著升高,Proteobacteria、Verrucomicrobia显著降低,EtOH+LGG组、EtOH+Bifi组和EtOH+Mix组相较于EtOH组Actinobacteria水平显著降低,Proteobacteria、Verrucomicrobia水平升高;属水平上,EtOH组相较于Ctrl组Olsenella、Bacteroides和Alloprevotella显著升高,Akkermansia和Parasutterella显著降低,EtOH+LGG组、EtOH+Bifi组和EtOH+Mix组相较于EtOH组Olsenella和Alloprevotella水平显著降低,Akkermansia水平显著升高;通过LEf Se差异分析可知,Ctrl组特异性差异菌为16种,LGG组7种,Bifi组3种,Mix组9种,EtOH组8种,EtOH+LGG组3种,EtOH+Bifi组7种,EtOH+Mix组4种;通过KEGG代谢通路分析得出,主要有10条通路受到影响,分别为:脂质代谢、辅助因子和维生素的代谢、氨基酸代谢、转录、翻译、信号转导、复制和修复、细胞活性、核苷酸代谢和能量代谢;将小鼠血清/肝脏指标与小鼠在门、属水平上肠道菌群进行相关性分析可知,MDA、肝脏指数、ALT和AST与Firmicutes、Actinobacteria、Parabacteroides、Alloprevotella、Parasutterella、Alistipes和Olsenella正相关,与Akkermansia、Parasutterella、Lactobacillus、Bilophila、Verrucomicrobia和Proteobacteria负相关;ADH和ALDH与Akkermansia、Verrucomicrobia、Proteobacteria、Parasutterella正相关,与Bacteroidetes、Actinobacteria、Parabacteroides、Alloprevotella、Alistipes、Olsenella、Barnesiella和Lactobacillus负相关。结论 鼠李糖乳杆菌、乳双歧杆菌及鼠李糖乳杆菌-乳双歧杆菌二菌复合均具有对酒精诱导小鼠肝损伤的保护作用,其机制可能与抑制肝脏炎症和氧化应激、调节胆汁酸代谢、改善肠道菌群有关,且在抑制肝脏炎症和调节胆汁酸代谢方面以鼠李糖乳杆菌-乳双歧杆菌二菌复合效果最佳,在抑制氧化应激方面以单个菌效果较好且鼠李糖乳杆菌和乳双歧杆菌效果相似。