论文部分内容阅读
目的:观察RCAN1、钙调神经磷酸酶A(CnA)在下肢动脉硬化支架术后支架内再狭窄组织中的表达,探讨其与再狭窄的作用及相关性。方法:收集2013年9月至2016年6月重庆医科大学附属第一医院血管外科中心下肢闭塞性动脉硬化股浅动支架术后再狭窄截肢患者血管标本15例,取支架段、支架近端,支架远端血管组织,采用HE及Masson染色观察血管组织形态学变化;Real-time PCR检测RCAN1mRNA,CN mRNA在各组中的表达;Western blotting检测RCAN1、CnA、增殖细胞核抗原(PCNA)在支架段、支架近端,支架远端血管组织的表达;免疫组化检测RCAN1、CnA、a-SMA蛋白的表达,免疫荧光检测RCAN1、CnA蛋白分布;免疫共沉淀检测RCAN与CnA蛋白之间的互相作用。结果:形态学观察示:支架术后3-6月支架狭窄段血管组织形态变化明显,管腔闭塞,支架腔内长满新生组织;支架近端血管内膜组织显著增厚,血管平滑肌细胞排列紊乱;支架远端组织血管内膜稍增厚,血管平滑肌组织排列整齐。Western blotting及Real-time PCR结果显示RCAN1在支架远端组织的表达水平显著高于支架近端组织和支架狭窄段组织的表达水平(P<0.05),RCAN1在支架近端组织的表达水平显著高于支架狭窄段组织(P<0.05);CnA在支架狭窄段组织的表达显著高于支架近端组织(P<0.05),其在支架狭窄段组织的表达显著高于支架近端组织(P<0.05)。PCNA在狭窄组织中的表达显著高于支架近端及支架远端组织。免疫组化结果示a-SMA在支架狭窄段新生组织中表达,RCAN1和CnA主要在细胞质中表达;免疫荧光结果显示RCAN1和CnA与a-SMA共表达。免疫共沉淀示RCAN1与CnA蛋白在血管组织中存在相互作用。结论:RCAN1蛋白、CnA在人体动脉支架术后血管组织中异常表达;RCAN1的表达水平降低与CnA的表达水平增高可能与支架内再狭窄发生有关;RCAN1-CN信号通路可能通过调节VSMC的增殖进而参与再狭窄的病理过程。