T-2毒素对TM3细胞损伤作用的研究

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T-2毒素是由镰刀菌在特定条件下产生的单端孢霉烯族毒素,分布非常广泛,是污染谷物及其制品的主要毒素,世界卫生组织和联合国粮农业组织曾将其与黄曲霉毒素一样列为天然存在的最危险的食品污染源;据报道T-2毒素对成年雄性动物的生殖系统具有毒性作用。本研究以小鼠睾丸间质细胞(TM3)为实验模型,利用分子生物学,细胞生物学等技术手段,研究T-2毒素对TM3细胞的毒性作用。目的:探索T-2毒素对TM3细胞的毒性作用,揭示其毒性作用的分子机制,为T-2毒素的相关基础研究提供理论依据。方法:采用不同浓度的T-2毒素对TM3细胞染毒24 h,MTT法检测TM3细胞增殖率,荧光探针Fluo-2 AM检测细胞内钙离子(Ca2+),抗氧化活性通过测量超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase,SOD)、过氧化氢酶(Catalase,CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(Glutathione peroxidase,GSH-Px)、丙二醛(Malondialdehyde,MDA)和活性氧(Reactive oxygen species,ROS),线粒体功能检测ATP水平以及Na+-K+-ATP ase和Ca2+-Mg2+-ATPase活性;流式细胞仪检测TM3细胞凋亡率,荧光探针罗丹明-123检测TM3细胞的线粒体膜电位(Mitochondrial membrane potential,MMP)变化,荧光定量PCR检测凋亡相关基因Bax和Bcl-2的表达水平;最后添加自由基清除剂Trolox对细胞凋亡率和细胞存活率进行检测。结果:1)T-2毒素处理24 h后造成TM3细胞中SOD、CAT、GSH-Px的活性降低;2)细胞线粒体膜电位、ATP水平、Na+-K+-ATPase和Ca2+-Mg2+-ATPase活性呈下降趋势;3)随着T-2毒素浓度的加大,细胞中MDA的含量和ROS的含量以及细胞内Ca2+呈显著上升趋势;4)Bax/Bcl-2表达水平和细胞凋亡率的检测结果呈极显著上升趋势,且呈量效关系;5)Trolox可以降低细胞的凋亡率并提高细胞存活率。结论:1)T-2毒素能够破坏TM3细胞结构功能的完整性,不利于细胞存活;2)氧化应激在T-2毒素造成TM3细胞损伤过程中起着关键作用;3)T-2毒素诱导TM3细胞的凋亡与线粒体损伤有着密切关系。
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