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荷斯坦奶牛(Holstein)具有体格健壮,适应性强,产奶量大等特点,在我国的大部分地区均有饲养。为增加其产奶量,一种小分子多肽性激素——催乳素(Prolactin,PRL)被应用到奶牛催乳过程中。本实验主要研究PRL对体外培养的乳腺干细胞的增殖及分化影响。首先利用机械获取法纯化实验室已分离的乳腺干细胞,再通过诱导分化和标记基因检测的方法进行鉴定。其次选择不同浓度PRL刺激乳腺干细胞,通过MTT法和RealtimePCR研究体外PRL对乳腺干细胞促进增殖和分化的最适浓度。研究结果如下:1.对机械获取法纯化的乳腺干细胞诱导,证明其具有分化成骨髓细胞、脂肪细胞、神经细胞的多潜能性,能够表达多种干性基因。2.用0、100、300、500、700 ng/mL五个浓度的PRL对乳腺干细胞进行处理,经过MTT法研究分析,500ng/m L PRL对体外乳腺干细胞具有最适增殖作用。3.用0 ng/mL、100 ng/mL、300 ng/m L、500 ng/mL、700 ng/mL五个浓度的PRL刺激乳腺干细胞,分别在0 d、1 d、3 d、5 d、7 d、9 d、11 d和14 d提取细胞总RNA,采用RealtimePCR方法测量乳腺干细胞标记基因PROCR、Sca-1、上皮细胞标记基因CK8三个基因表达量。结果显示:体外培养100 ng/mL PRL时CK8相对表达量最大;700 ng/mL PRL时PROCR、Sca-1相对表达最大。