多聚物支架PPS/PSeD和脂肪间充质干细胞脱细胞基质DMA影响视网膜干细胞增殖分化的研究

来源 :上海交通大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:scottwong522
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目的:  本论文将探讨不同来源的生物材料如多聚物材料PPS(Poly(1,3-propylene sebacate))、PSeD(poly(sebacoyl diglyceride))和脂肪干细胞来源脱细胞基质应用于视网膜干细胞(RPCs)培养中,评估其对RPCs增殖和分化的影响,为退行性视网膜疾病的细胞替代治疗提供新的实验依据。  方法:  1.倒置显微镜下记录在PPS和PSeD上生长的细胞形态。细胞毒性试验分析两种材料的细胞相容性。qPCR和蛋白质免疫印迹检测RPC增殖分化相关基因和蛋白的表达。  2.从人脂肪组织中分离提取ADSCs后,经过培养使细胞融合,然后经化学+生物法处理将细胞脱去,仅保存细胞外基质并用于RPCs的增殖和分化培养。  3.显微镜、电镜下记录在脱细胞基质材料上生长的细胞形态;qPCR、免疫组化和蛋白质免疫印迹检测RPC增殖分化相关基因和蛋白的表达。  结果:  1.RPCs在PPS和PSeD上生长后,炎症因子IL-6的表达量显著下降,且粘附因子cadherin4表达显著上升,表明材料具有良好的细胞相容性。两种材料分别对RPCs的增殖和分化产生不同的影响:RPCs在PPS上生长后CCK8检测中的O.D.值显著增加,且nestin呈现高表达,表明PPS可以促进细胞增殖;PSeD可加强RPCs向map-2和 rhodopsin阳性的视网膜神经元分化。  2.从人脂肪组织中成功分离hADSCs后,制成脱细胞基质供RPCs在其上生长。与对照TCP相比,RPCs在DMA上生长后Ki67的表达明显升高;分化条件下,DMA可加强 RPCs向β3-tublin、recoverin和rhodopsin表达阳性的视网膜神经元细胞的分化。  结论:  1.PPS有明显的促RPCs增殖能力,PSeD有显著促RPCs分化能力,提示PPS和PSeD在视网膜细胞移植治疗中是一个良好的支架材料的选择。  2.DMA能明显促进RPCs的增殖和向视网膜神经元(包括光感受器细胞)方向的分化,提示 DMA在视网膜组织工程中为视网膜干细胞的增殖和分化提供了良好的微环境。
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