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背景程序性死亡受体-1(programmed death 1, PD-1)是CD28家族中的成员。活化的T细胞与B细胞表达PD-1。PD-1通过与程序性死亡受体配体1(programmed death ligand 1, PDL1)或程序性死亡受体配体2(programmed death ligand 2, PDL2)结合,传递抑制性协同刺激信号。T细胞与B细胞在类风湿关节炎发病中起重要作用。作为一个重要的T细胞与B细胞活化的负性调节分子,PD-1可能是一个治疗类风湿关节炎(rheumatoid arthritis, RA)的靶点。mPDL1-hIg是由小鼠PDL1胞外段与人IgGFc组成的融合蛋白,具有小鼠PDL1的生物活性。由于mPDL1-hIg含有人IgGFc,因而mPDL1-hIg能比较容易地检测及纯化。而且,mPDL1-hIg中人IgGFc理论上可延长mPDL1-hIg中小鼠PDL1胞外段的半衰期,有利于mPDL1-hIg中小鼠PDL1胞外段在体内发挥效应。Ⅱ胶原诱导关节炎(CollagenⅡ-induced arthritis, CIA)是广泛用来研究人类风湿关节炎发病机制的实验关节炎模型。目的在成功构建mPDL1-hIg基因真核表达载体、进而获得稳定表达mPDLl-hIg的CHO细胞株,从而获得mPDL1-hlg的基础上,探讨nPDL1-hIg对CIA的效应,为探索治疗RA提供新思维、新方法以及实验依据。方法①活化的正常小鼠去红细胞的脾细胞与mPDL1-hIg相互作用后,再与荧光素标记的抗人IgG二抗作用,流式细胞术检测活化的正常小鼠去红细胞的脾细胞与mPDL1-hIg的结合率。②小牛Ⅱ型胶原2次免疫的小鼠去红细胞的脾细胞经过CFSE染色后,再用变性小牛Ⅱ型胶原刺激。流式细胞术检测mPDL1-hIg对变性小牛II型胶原刺激的细胞增殖的影响,ELISA法检测mPDL1-hIg对变性小牛Ⅱ型胶原刺激的细胞表达IL-17与IL-23的影响。③小牛Ⅱ型胶原2次免疫小鼠诱导CIA,并将小牛Ⅱ型胶原免疫小鼠随机分成2组：实验组与对照组,实验组小鼠用mPDL1-hIg治疗,对照组小鼠用人IgG治疗。从第0天起,每天观测小鼠(第二次免疫的时间确定为第0天)。④在第九天,取mPDL1-hIg治疗的CIA小鼠和人IgG治疗的CIA小鼠的血清,ELISA法检测血清中IL-17与IL-23的表达。⑤在第九天,取血清后,用颈椎脱位法处死mPDL1-hIg治疗的CIA小鼠和人IgG治疗的CIA小鼠,然后迅速剪取脚爪组织,快速置入10%福尔马林溶液,固定脚爪组织；接着将固定好的脚爪组织移入10%EDTA溶液中脱钙；脱钙完成后冲洗、脱水、包埋成蜡块,最后切片及HE染色。⑥mPDLl-hIg治疗的和人IgG治疗的CIA小鼠的去红细胞的脾细胞经过CFSE染色后,再用变性小牛Ⅱ型胶原刺激,流式细胞术检测mPDL1-hIg治疗对变性小牛Ⅱ型胶原刺激的CIA小鼠去红细胞的脾细胞增殖的影响,ELISA法检测mPDL1-hlg治疗对变性小牛Ⅱ型胶原刺激的CIA小鼠去红细胞的脾细胞表达IL-17与IL-23的影响。⑦全部数据采用平均数±标准差表示,两组数据间差异显著性检测采用U检验。用SPSS13.0统计分析软件处理数据,p<0.05有显著性差异。结果①流式细胞术检测结果显示：mPDL1-hIg可与活化的正常小鼠去红细胞的脾细胞结合；在我们实验条件下,结合率约为43.62%。②流式细胞术证明：mPDLl-hIg可抑制变性小牛Ⅱ型胶原刺激的来源于小牛Ⅱ型胶原免疫小鼠的去红细胞的脾细胞增殖；ELISA检测结果表明：mPDLl-hIg可抑制变性小牛Ⅱ型胶原刺激的来源于小牛Ⅱ型胶原免疫小鼠的去红细胞的脾细胞表达IL-17与IL-23。③mPDL1-hIg治疗可显著降低小牛Ⅱ型胶原免疫小鼠的的临床评分,尽管发病率没有受到影响(实验组与对照组的发病率都是6/7(86%))。来源于mPDL1-hIg治疗小鼠和人IgG治疗小鼠的脚爪组织切片HE染色后显示,mPDL1-hIg治疗可减轻关节病理改变。这些结果证明,mPDL1-hIg治疗可抑制CIA加重,提示：PD-1-PDL途径涉及CIA的病理机制。④LISA检测结果表明：mPDL1-hlg治疗可下调CIA小鼠血清中IL-17与IL-23的表达。⑤流式细胞术证明：mPDL1-hlg治疗能够抑制变性小牛Ⅱ型胶原刺激的CIA小鼠去红细胞的脾细胞增殖。ELISA检测结果表明：mPDLl-hIg治疗能够抑制变性小牛Ⅱ型胶原刺激的CIA小鼠去红细胞的脾细胞表达IL-17与IL-23。这些结果提示：mPDLl-hlg治疗通过抑制细胞增殖及IL-17与IL-23的表达而改善CIA。结论mPDL1-hIg可显著改善CIA,表现在降低临床评分、减轻关节病理改变及下调血清中IL-17与IL-23的表达。mPDL1-hIg可通过抑制细胞增殖及IL-17与IL-23的表达而减轻CIA。