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哺乳动物早期胚胎的体外培养是胚胎工程技术中一个重要的环节。无论是在阐明早期胚胎的发育机理、制作转基因动物等研究领域,还是在生产领域为胚胎移植提供大量可移植胚胎等方面都发挥着举足轻重的作用。国内外学者在该领域已经进行了大量卓有成效的研究。但是到目前为止体外培养的哺乳动物早期胚胎,高质量的囊胚发育率还不高,都还远远不能满足人们生产和研究的需求。近年来,大多数的研究者都将注意力放到了培养液配方改良的研究上,而忽略了胚胎的培养方法对胚胎体外培养的贡献。事实上胚胎在体内的发育环境是动态的,并有输卵管上皮细胞的支持。本研究旨在设计创新一种动态的物理培养系统,观察与检测胚胎体外发育情况,以便支持并改善早期胚胎的体外发育效果。本试验自制了流动培养装置实现了对胚胎的动态培养,以昆明小白鼠为实验材料,研究比较了流动培养、开放式培养和常规微滴培养三种方法对小鼠2-细胞胚胎体外发育率的影响。同时比较了三种培养方法中加入输卵管上皮细胞后的培养效果。试验结果如下: 试验一 适宜流速的筛选。 本试验选取了0.05ml/h、0.1 ml/h、0.2ml/h三个当量的流速作为试验流速,并分别以这三种流速对小鼠的2细胞胚胎进行了体外培养;以囊胚出现比率为检测指标,对培养效果进行了观察和比较,结果发现:0.05ml/h时效果较好,培养72小时后能获得较高的囊胚率(73.3%,22/30):0.1ml/h和0.2ml/h组分别获得(51.6%,15.5/30:35%,10.5/30),三组结果差异极显著P<0.01。后期试验采用的流速为0.05ml/h。 试验二 流动培养、微滴培养和开放式培养三种培养方法培养结果比较。 本试验以囊胚出现比率为检测指标,对开放式培养、微滴培养和流动培养三种培养方法,体外培养小鼠2细胞胚胎的结果进行了比较。结果发现:开放式培养在72小时后能获得较高的囊胚率:75%(22.5/30)。流动培养方法较微滴培养方法的囊胚率略高73.3%(22/30):71.7%(21.5/30);三种培养方法的培养结果差异不显著P>0.05。培养72小时后胚胎的退化率为:流动培养组最低(16.7%,5/30),微滴组和开放组的退化率均为21.7%(6.5/30)。 试验三 输卵管上皮细胞对三种培养方法的贡献值比较。 本试验通过在三种培养系统中添加水牛输卵管上皮细胞,来实现对小鼠胚胎共培养的目