论文部分内容阅读
目的：
1.探讨中国人群中常染色体显性视神经萎缩(autosomaldominantopticatrophy，ADOA)发病的分子机制。
2.了解OPA1基因c.C1198G(p.P400A)突变对ADOA临床表型、外显率和表现度的影响。
3.分析其他因素(其他核修饰基因、线粒体单体型、个人因素以及环境因素等)在疾病的表型表达、外显率以及表现度方面的作用。
方法：
1.通过温州医学院眼视光医院与北京中医药大学东方医院、福建医科大学附属第一医院以及全国各地其他医院合作，共同收集视神经萎缩家系。经温州医学院伦理道德委员会及辛辛那提儿童医院医学中心委员会许可，经病人及所有受试者同意，签署知情同意书，了解家系情况，采集血样。本课题共收集无血缘关系的118例ADOA患者和102例正常对照血液标本。
2.对该家族中的所有成员进行眼科检查，包括标准对数视力表检测视力，俞自萍色觉图检查，Humphrey视野计按程序SITA检查(HumphreyVisualFieldAnalyzerIIi，SITAStandard)，德国罗兰电生理仪(RolandConsultRETIportgamma，patternorflashVEP)检查视觉诱发电位(visualevokedpotentials，VEP)以及佳能眼底数码彩照(CanonCR6-45NMfunduscamera)拍摄眼底照片。
3.提取血液/滤纸片标本基因组DNA，对收集的118例病人样本进行OPA1基因8、9、12和27四个外显子所在区域进行筛查。
4.对携带杂合性c.C1198G(p.P400A)突变家系先证者OPA1基因以及线粒体基因组全序列进行扩增，纯化后产物测序。
5.使用各种生物软件分析OPA1基因以及线粒体基因组的测序结果，找出所有多态性位点和突变位点，分析其对线粒体功能的影响。
6.对携带杂合性c.C1198G(p.P400A)突变的家系进行限制性片段长度多态性(restrictionfragmentlengthpolymorphism，RFLP)分析。
7.收集该家系临床资料，整理并分析杂合突变c.C1198G(p.P400A)、mtDNA突变以及线粒体单体型与疾病的遗传特征和临床表型之间的相关性。
结果：
1.筛查发现一个携带杂合性c.C1198G(p.P400A)突变的四代中国ADOA家系，而在102例对照中并未发现该突变位点。对该家系成员OPA1基因的外显子12进行扩增，测序结果显示：10个家系成员携带该突变，其中8位患病，2位视力表现正常，外显率为80％，发病年龄为5～20岁，平均发病年龄为13.4岁，患病男女之比为1:1。
2.对该位点所在区域PCR扩增后测序及RFLP分析，结果均显示：c.C1198G(p.P400A)为杂合突变。
3.该家系成员线粒体基因组测序结果分析表明：该患者属于线粒体单体型M9a。
结论：
1.中国人群中存在ADOA相关的杂合突变c.C1198G(p.P400A)，而在102例对照中并未发现，表明该突变可能与ADOA的表型表达有关；家系中并非所有突变携带者均发病，说明OPA1基因突变具有不完全外显的特征。
2.单体型M9a在疾病的发生、发展中可能起一定的作用。
3.不完全外显和表型差异表明：c.C1198G(p.P400A)突变本身尚不足以导致ADOA的发生，其他因素(其他核修饰基因、线粒体单体型、个人因素以及环境因素等)可能对疾病的表型表达，外显率和表现度有一定的影响。