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本研究参考了前人关于TAC文库及BAC文库的构建方法,建立了自己的一套高效的TAC文库构建的技术体系。包括载体检测;高分子量DNA的获得;大量部分酶切最佳条件的确定;片段大小的选择;高效的连接与转化体系等,最终得到所需大小的插入片段,转化效率高,重组率高,空载率低的TAC文库构建体系。
利用所建立的高效TAC文库构建技术体系,以pYLTAC17为载体,构建了多枝赖草的TAC文库,选择幼嫩的多枝赖草叶片,分离细胞核,在相差显微镜下进行核完整性的检测和计数以调整合适的核浓度为29X107个/ml;到目前为止共获得500,000个TAC克隆。TAC克隆以单克隆及克隆池两种形式保存,随机挑取50个TAC克隆用碱裂解法提取质粒,琼脂糖凝胶电泳检测空载率6﹪,重组克隆率94﹪。