碱提糙皮侧耳水溶性多糖WPOP-N1的结构解析及抗肿瘤机制研究

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食用真菌被认为是目前最具开发前景的保健食品和药品的新资源,对食用真菌的药理活性研究也成为当今炽热的研究热点。多糖及其复合物是真菌中的重要活性成分,是真菌发挥药理活性的物质基础,研究表明真菌多糖具有抗肿瘤、抗氧化、降血脂以及免疫调节功能等。糙皮侧耳是世界范围内最重要的人工培育食用真菌之一。水提糙皮侧耳多糖及蛋白聚糖成分具有显著的抗肿瘤作用,而碱提多糖的构象分析与活性报道较少。为了充分发掘糙皮侧耳的药用价值,以及在糙皮侧耳中筛选新型抗癌药物的先导化合物,我们利用碱提法分离纯化糙皮侧耳多糖,并鉴定其生物活性,揭示其抗肿瘤的效果及可能的作用机制。研究内容如下:通过碱液提取、乙醇沉淀、反复冻融、酶法与Sevag法联合脱蛋白,以及离子交换与分子排阻柱层析方法,分离得到糙皮侧耳碱提水溶性多糖WPOP-N1;利用经典化学方法(部分酸水解、高碘酸氧化、Smith降解、甲基化和乙酰化衍生)及仪器分析手段(高效液相色谱、气相色谱、红外光谱、气-质联机)对糙皮侧耳多糖级份的理化性质及结构特征进行描述;利用BalB/c小鼠前肢皮下注射S-180肉瘤细胞建立肿瘤小鼠模型以及体外MTT实验,在整体及细胞水平上评价WPOP-N1的抗肿瘤作用效果;通过检测WPOP-N1对淋巴细胞增殖、巨噬细胞吞噬能力、以及对细胞因子(TNF-α)及抗肿瘤效应物(NO)释放水平的影响,从细胞免疫与体液免疫两个层面揭示WPOP-N1的免疫调节活性;利用RT-PCR及Western Blot,在mRNA水平及蛋白水平上,检测了iNOS和TNF-α的表达情况,以及NF-κBp-65亚基磷酸化、IκB蛋白降解情况,揭示WPOP-N1刺激巨噬细胞相关抗肿瘤活性因子(NO和TNF-α)的表达分子机制。综合上述实验结果,阐明WPOP-N1在体内具有较强抗肿瘤作用,而在体外不具有细胞毒效应;WPOP-N1可以提高荷瘤小鼠的胸腺指数、脾指数及血清中的TNF-α含量;WPOP-N1可以协同ConA及LPS增加淋巴细胞增殖能力,增强活化巨噬细胞吞噬能力,并通过增强NF-κB转录因子活性使其分泌相应的抗肿瘤活性物质(NO和TNF-α),推测WPOP-N1的抗肿瘤活性可能是通过增强机体免疫功能实现的。同时,为糙皮侧耳这一重要资源的深入开发利用提供理论基础。
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